免疫熒光(Immunofluorescence)又稱熒光抗體技術,是標記免疫技術中發展早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。
免疫熒光(Immunofluorescence)又稱熒光抗體技術,是標記免疫技術中發展早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。
免疫熒光原理
免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性,所以當抗原抗體發生反應時,只要知道其中的一個因素,就可以查出另一個因素。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體(或抗原)上,與其相應的抗原(或抗體)結合后,在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。
免疫熒光主要步驟:
石蠟切片復水,或是冰凍切片;
抗原修復(需要時);
抗體封閉液封閉;
一抗反應4度,6小時;
PBS洗滌3次;
熒光標志的二抗,37度,30分鐘;
PBS洗滌3次;
抗熒光衰減封片劑封片。
免疫熒光主要特點
優點:
特異性強;
敏感性高;
可進行多色熒光共同染色
缺點:尚存在非特異性染色的問題,技術程序比較復雜。
免疫熒光結果:
抗原存在部位帶有二抗標志的熒光。