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革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法，1884年由丹麥醫師Gram創立。未經染色之細菌，由于其與周圍環境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀察。染色后細菌與環境形成鮮明對比，可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特征，而用以分類鑒定。革蘭氏染色屬復染法。
革蘭氏染色液原理：
通過結晶紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物，革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現縫隙，因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出，因此通過乙醇脫色后仍呈無色，再經沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。染色的差異主要是由于陰性與陽性細菌細胞壁的差異所引起的。
革蘭氏染色液材料：
1.葡萄球菌和大腸桿菌混合菌液。
2.結晶紫染色液
3.革蘭氏碘液
4.95%酒精。
5.番紅染液
6.載玻片方法、涂片標本的制備（見實驗一）
革蘭氏染色法1.初染：在上述已固定的涂片上，滴加結晶紫染液，染色1分鐘，水洗。
2.媒染：滴加革蘭氏碘液，作用1-3分鐘，水洗3.脫色：滴加95%酒精，并頻頻搖動玻片，至無紫色脫出為止（約20秒），水洗復染：加番紅染液，復染半分鐘，水洗，用吸水紙印干后，油鏡檢查結果：視野中可以察見兩種細菌葡萄球菌：紫色、球形、葡萄狀排列。
大腸桿菌：紅色、桿狀、散在排列。
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