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單克隆抗體的肽圖分析：UHPLC 性能與表面 多孔顆粒相結合
閱讀：378 發布時間：2018-12-17| 提 供 商 | 上海斯邁歐分析儀器有限公司 | 資料大小 | 923KB |
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反相色譜 (RP) 肽圖分析是生物治療藥物分析中主要的技術，可為生物制藥產品提供全
面的表征。當與質譜儀 (MS) 聯用時，能實現對蛋白質及其變異體的鑒定，確定翻譯后修
飾 (PTM) 及其位點，并確認蛋白質序列。然而，由于蛋白質裂解物固有的復雜性，使得
利用色譜進行肽圖分析非常具有挑戰性。因此，許多組織都致力于開發穩定、可靠的肽
圖分析方法。通常而言，肽圖分析受到靈敏度低、峰形差及需要較長分離時間來達到所
需分離度的影響。
近年來，人們應用安捷倫超液相色譜 (UHPLC) 以克服這些挑戰，與常規 HPLC 相比，
UHPLC 經證實具有超高分離度、更高的靈敏度，且可大大縮短分析時間。UHPLC 技術
可更詳盡地表征蛋白生物治療藥物，其通過加快流速、縮小粒徑及縮短柱長，可在更短
的分析時間內實現更高的分離性能。但是，這種類型的分離對壓力要求越來越高，不能
在常規的 400 和 600 bar 液相色譜儀上進行操作，嚴重地限制了其應用范圍。
為了解除這種限制，安捷倫引入一種 2.7 µm AdvanceBio 肽圖分析色譜柱以彌補生物治療藥物表征中的關鍵缺陷，可在常規液相色譜系統壓力下，實現快速而的肽圖分析。采用表面多孔色譜填料，AdvanceBio 肽圖分析色譜柱可在很短的分析時間和低系統壓力下大大改善肽圖分析，同時保持很高的峰性能和分析效率。本研究采用 AdvanceBio 肽圖分析色譜柱，在較短的分析時間內對一種單克隆抗體 (mAb) 胰蛋白酶消化物進行 LC/MS 肽圖分析。此外還將 AdvanceBio 色譜柱及方法與一種亞 2 µm 非安捷倫 UHPLC 肽圖分析色譜柱進行性能比較。