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使用 Ultivo 三重四極桿液質聯用系統分析動物飼料基質中的氨基酸
閱讀：681 發布時間：2020-7-11摘要：本應用簡報介紹了一種使用 Agilent Ultivo 三重四極桿液質聯用系統定量分析非衍生化氨基酸的快速簡便的分析方法。 Ultivo 專為解決實驗室面臨的諸多挑戰而設計，本研究旨在評估此款全新液質聯用系統分析典型的內源性目標分析物的性能。Ultivo 采用的創新技術既能減小儀器體積，也能夠實現與大型質譜系統相當的分析性能。本研究概述了應用 Ultivo 液質聯用系統結合 HILIC 色譜法分析游離氨基酸的常規性能驗證。考察了定量下限 (LLOQ)、色譜精密度、線性動態范圍和準確度。
前言：氨基酸是蛋白質的結構單元，是均衡飲食的必要組分。對于寵物和家畜，飼料中必須提供必需氨基酸，包括半胱氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨酸。為確保動物飼料質量，提供均衡飲食，寵物食品和動物飼料營養公司需要監測其產品是否存在上述氨基酸，以及其他非必需氨基酸。傳統上，氨基酸分析使用耗時耗力的水解和衍生化對樣品進行前處理，這可能會限制分析的速度。但是，之前的研究發現，使用親水相互作用色譜 (HILIC) 通過低 pH 溶劑和正離子模式質譜檢測分析未衍生化氨基酸時，能夠獲得出色的靈敏度與準確度。 Ultivo 專門設計用于解決實驗室進行常規分析時所面臨的眾多挑戰。Ultivo 采用的創新技術可減小其整體體積，同時性能可與傳統系統相媲美（圖 1）。Cyclone Ion Guide 氣旋離子導軌、Vortex Collision Cell 渦流碰撞室和雙曲面四極桿等創新技術大程度提高了小體積儀器的定量分析性能，改善了儀器的可靠性和穩定性，延長了正常運行時間。在本應用中，我們使用新型 Ultivo 三重四極桿液質聯用系統對動物飼料中的 17 種未衍生化氨基酸進行了靈敏而精確的定量分析（圖 1）。
實驗部分：試劑與化學品使用的所有試劑均為 HPLC 或 LC/MS 級。乙腈購自 Honeywell (Morristown, NJ, USA)，超純水產自配有 LC-Pak Polisher 和 0.22 µm 膜式終端過濾器濾芯的 Milli-Q Integral 水純化系統 (EMD Millipore, Billerica, MA, USA)。甲酸和乙酸銨購自 Fluka （Sigma-Aldrich 公司，St. Louis, MO, USA）。化學標準品購自 Pierce (Thermo Scientfic, Waltham, MA, USA)。樣品前處理用水逐級稀釋配制標樣。動物飼料購自當地供應商，并進行了研磨。稱量 0.1 g 樣品加入 250 mL 錐形燒瓶中，使用 25 mL 6 mol/L 含苯酚的 HCl。將燒瓶通氮氣 23 小時，然后取出并冷卻至室溫。將樣品轉移到 50 mL 容量瓶中，容量瓶在加入樣品之前用 0.1 mol/L HCl 沖洗。用 0.1 mol/L HCl 對容量瓶定容，混勻。將等分樣品轉移到樣品瓶中放入 LC/TQ 系統檢測。
數據分析：利用 Agilent MassHunter 采集軟件 (C.01.00) 進行系統控制和數據采集。使用純化合物溶液進樣檢測，通過 MassHunter Acquisition Optimizer 軟件優化 MRM 離子對，以確定母離子和子離子、碎裂電壓和碰撞能量。使用 Agilent MassHunter 定量分析軟件 (B.09.00) 和定性分析軟件 (B.08.00) 分析數據。儀器 Agilent 1260 Infinity II 生物惰性 HPLC • 1260 Infinity II 生物惰性泵 (G5654A) • 1260 Infinity II 生物惰性 Multisampler (G5668A) • 1260 Infinity II 高容量柱溫箱 (G7116A) Agilent Ultivo 三重四極桿液質聯用系統 • 安捷倫噴射流電噴霧離子源方法表 1 匯總了 1260 Infinity II 生物惰性 HPLC 的條件。表 2 匯總了 Ultivo 三重四極桿參數和安捷倫噴射流 ESI 離子源參數。采用正離子模式和動態多反應監測 (dMRM) 進行分析。采用具有 Quant-My-Way 工具的 MassHunter 定量分析軟件 B.09 對數據進行評估。
結論： Ultivo 是一款創新的三重四極桿質譜儀，可大程度減小對實驗室工作空間的需求并能減少維護。液質聯用系統可準確靈敏地檢測動物飼料基質中需要常規監測的氨基酸，而使用 Poroshell 120 HILIC-Z 色譜柱可使分析物在非衍生化狀態下得到分析，從而簡化工作流程。