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分析有機磷農藥的實驗方法-® LC-MS/MS液質分析系統
閱讀:2484 發布時間:2019-12-22API 3200™ 或3200 QTRAP® LC-MS/MS液質分析系統色譜分離流動相的制備:
1M甲酸銨溶液:稱取 63g甲酸銨,溶于1L HPLC級的水中。
流動相A:在1L水 (HPLC級) 中加入5mL 1M 甲酸銨溶液。
流動相B:在1L甲醇 (HPLC級) 中加入5mL 1M 甲酸銨溶液。
樣品制備(水果與蔬菜基質)
基于Anastassiadies等人提出的方法[1]:
1. 稱量10g切碎的樣品;
2. 加入100µL 內標溶液(D5-莠去津 1µg/mL);
3. 加入10mL乙腈,劇烈振搖;
4. 加入4g無水MgSO4和1g的NaCl;
5. 馬上渦旋混合,以防止MgSO4共聚物的生成;
6. 振搖30s后,4300r/min離心5min;
7. 取出1mL初提液,轉移至含有150mg無水MgSO4的離心管中;
8. 混合,5200r/min 離心1min;
9. 取出500µL上清液,用水將稀釋到1mL,得到提取液濃度約為0.5g/mL。
基于Klein and Alder等人提出的方法[2, 3]:
1. 在5g或10g樣品中,加入水到10mL;
2. 加20mL甲醇,使用UltraTurrax 組織勻漿機勻漿2min ;
3. 有時需要過濾或離心;
4. 加入NaCl 溶液 (100mL水中含20 g NaCl ),每6mL加入NaCl溶液2mL ;
5. 用5mL樣品溶液浸泡ChemElut 柱;
6. 5min后,用16mL二氯甲烷洗脫;
7. 40℃揮發至干;
8. 用甲醇與水的混合溶液1.25mL (甲醇0.25mL,水1mL) 重新溶解;
9. 用0.45µm濾膜過濾。
基于Lehotay et al.[4]提出的方法:
1. 使用Molinex 混合器或類似設備勻質水果或蔬菜樣品;
2. 加入乙腈,(15.0± 0.05)g勻質的樣品加乙腈15mL,超聲提取2min后,混旋5min;
3. 加入6g無水MgSO4和1.5g NaCl的混合物,劇烈振搖1min;
4. 3000 r/min 離心5 min;
5. 取5mL上層溶液,加入1.8g無水MgSO4 和 0.3g Bondesil C8吸附劑;
6. 振搖20s;
7. 使用Eppendorf 5301型濃縮儀,或類似設備揮發至干;
8. 用乙腈/水=1/9的溶液1mL重新溶解樣品;
9. 12000r/min高速離心 2min;
10. 上清液轉入自動進樣器的進樣瓶中備用。
樣品制備(蜂蜜、果汁、果酒)[5]
1. 預處理:
蜂蜜樣品,對無結晶的實驗室樣品將其攪拌均勻對有結晶的樣品,在密閉情況下,置于不超過60 ℃的水浴中溫熱,振蕩,待樣品全部融化后攪勻,迅速冷卻至室溫分出0.5 kg作為試樣,置于樣品瓶中,密封,并標明標記。果汁、果酒樣品,將取得的全部原始樣品倒入潔凈的搪瓷混樣桶內,充分攪拌棍勻,再將混勻樣品分裝出兩份(每份500mL),密封,作為試樣,標明標記。
2. 提取:
稱取15 g試樣(精確至0.01 g)于250mL具塞三角瓶中,加入30mL水,于40℃振蕩水浴上,振蕩溶解15min。加入10mL丙酮,然后將瓶中內容物移入50mL分液漏斗中。用40mL二氯甲烷分數次洗滌三角瓶,并將洗液倒入分液漏斗中,小心排氣,用力振搖8次,靜置分層,將下層有機相通過裝有無水硫酸鈉的筒形漏斗,收集于200mL雞心瓶中。再先后加入5mL丙酮和40mL二氯甲烷于分液漏斗中,振搖1min,靜置、分層后收集。如此重復提取兩次,合并提取液,將提取液于40℃水浴旋轉蒸發至約1mL,待凈化。
3. 凈化:
在Envi-Carb柱中加入約2 cm高無水硫酸鈉,將該柱連接在氨基Sep-Pak柱頂部,并將串聯柱放入下接雞心瓶的固定架上。加樣前先用4mL乙睛+甲苯(3+1)預洗柱,當液面到達硫酸鈉的頂部時,迅速將樣品提取液轉移至凈化柱上,再用2mL乙睛+甲苯(3+1)洗滌樣液瓶三次,并將洗液移入柱中。在串聯柱上加上50mL貯液器,用25mL乙睛 +甲苯(3+1)洗脫農藥,合并于雞心瓶中,并在40℃水浴中旋轉濃縮至約0.5mL。對氨基甲酸醋類農藥檢測,加入5mL甲醇進行溶劑交換兩次,后定容1mL,混勻,用于液相色譜—串聯質譜測定。對于其他農藥檢測,加入25mL正己烷進行溶劑交換兩次,后使樣液體積約為1mL,加入40µL內標溶液,混勻,用于測定
色譜分離條件:
Agilent 1100 系統:G1312A二元泵系統、G1367A型自動進樣器、柱溫箱。
色譜柱:Phenomenex Synergi Fusion-RP反相柱,50 mm×2 mm,粒徑 4µm。
流動相:A相—H2O+5mM 甲酸銨;B相—甲醇+5mM 甲酸銨
MS/MS 檢測:
API 3200™ 或3200 QTRAP® LC-MS/MS液質分析系統;TurboIonSpray®離子源,負離子模式,MRM 掃描方式