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技術文章

AB液質聯用儀分析孔雀石綠與相關的三苯甲烷類染料的實驗方法

閱讀:746          發布時間:2019-9-13

化學試劑 MG (孔雀石綠)     LMG (隱色孔雀石綠) C23H25N2    CAS: 2437-29-8    C23H26N2    CAS: 129-73-7     BG (亮綠)      CV (結晶紫) C27H33N2 CAS: 633-03-4    C25H30N3     CAS: 548-62-9   建議的內標:D5-LMG。

 

AB液質聯用儀色譜分離流動相的制備: 1 M乙酸銨溶液:溶解77 g甲酸銨于1 L HPLC級的水中。 流動相A:在1 L HPLC級的水中,加入1 mL甲酸,10 mL 1 M乙酸銨溶液。 流動相B:在100 mL水中,加入1 mL甲酸,10 mL乙酸銨溶液,混勻后,用HPLC級的乙腈稀釋到1 L。

 

樣品制備(魚、水產品) 基于Bergwerff等人提出的方法[1]: 1.將2 mL pH=3.0的Mcllvaine溶液、100 mL 1 M的p-TSA、50 mL的N,N,N,,N,-四甲基-1,4-苯乙烯二胺的甲 醇溶液(1 mg/mL)進行混合; 2.加入2 g勻漿的樣品于50 mL螺絲加蓋的聚丙烯管中; 3.渦旋混合; 4.加入12 mL乙腈; 5.振搖15 min; 6.15 ℃下,3400 r/min離心5 min; 7.加入pH=6.0的Mcllvaine溶液; 8.加入12 mL乙腈; 9.振搖15 min; 10.15 ℃下,3400 r/min離心5 min; 11.合并上清液;12.加入6 mL 二氯甲烷; 13.15 ℃下,3400 r/min離心5 min; 14.有機相進行固相萃取。

 

基于Effkemann等人提出的方法[2]: 1.稱量2 g勻漿過的魚肉組織; 2.加入100 µL內標溶液(D5-LMG,1 µg/mL); 3.加入900 µL水; 4.加入2 mL鹽酸羥胺溶液(5 g/L); 5.振搖并放置10 min; 6.加入8 mL乙腈; 7.振搖10 min; 8.4 ℃下,3000 r/min離心5 min; 9.將上清液吸入樣品,備用。 注意:新鮮的魚肉提取后,應在幾個小時內完成分析,以防止孔雀石綠、隱色孔雀石綠的降解。

 

色譜分離條件 Agilent 1100 系統:G1312A二元泵系統、G1367A型自動進樣器、柱溫箱。 AB液質聯用儀色譜柱:Phenomenex Synergi Max-RP反相柱,50 mm×2 mm,4 µm,80 Å。 流動相:A相—水 + 0.1%甲酸 + 10 mM 乙酸銨;B相—水 / 乙腈(10 / 90) + 0.1%甲酸 + 10 mM 乙酸銨。 梯度設置: 

 

 

 

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