熱啟動直擴(kuò)型Taq DNA聚合酶說明書

產(chǎn)品詳情

本酶為Taq-D DNA聚合酶（KlenTaq1）的熱啟動型，需95度加熱5分鐘或98度加熱2分鐘而激活。Taq-D DNA聚合酶是大腸桿菌重組表達(dá)的嗜熱細(xì)菌Thermus aquaticus來源的外切酶缺失型Taq DNA聚合酶（刪除了5’ 外切酶結(jié)構(gòu)域）。該酶具有5’→3’聚合酶活性，無5’→3’外切酶活性和3’→5’外切酶活性。擴(kuò)增產(chǎn)物具有3'-dA尾巴。不可用于Taqman探針法q-PCR。本酶經(jīng)基因工程改造，尤其適合于溶解曲線法單核苷酸多態(tài)性（SNP）分型。擴(kuò)增片段的長度可達(dá)3 kb。延伸速度為1.0 kb/min（72℃）。

特點

• 本酶為熱啟動聚合酶，可提高擴(kuò)增的特異性，減少非特異性擴(kuò)增和引物二聚體；

• 熱穩(wěn)定性好：95℃下半衰期超過40 min；

• 模板DNA耐受范圍廣；

• PCR產(chǎn)物具有3’-dA尾巴，可直接用于T/A克隆；

• 可以摻入dUTP、dITP、熒光標(biāo)記核苷酸。

• 相比普通Taq DNA 聚合酶，本酶更加適合未處理的血液、組織、唾液等樣本的PCR；

濃度2.5U/μl活性定義

以大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在72℃、30 min內(nèi)，將10 nmole脫氧核糖核苷酸摻入到酸不溶物中所需的酶量，定義為一個活性單位（U）。

酶貯存緩沖液

20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween 20, and 50% glycerol.

產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成

適用范圍

•      溶解曲線法單核苷酸多態(tài)性（SNP）分型

•      DNA熒光標(biāo)記

•      血液、組織樣本等直擴(kuò)PCR

應(yīng)用舉例

以下反應(yīng)舉例為50 μl標(biāo)準(zhǔn)PCR體系， 僅供參考。實際PCR條件應(yīng)根據(jù)模板、引物、目的片段大小加以優(yōu)化，確定最佳反應(yīng)條件。

*DNA template可參照如下標(biāo)準(zhǔn)（50 μl PCR體系）：

PCR反應(yīng)條件

注意事項

•      本酶為熱啟動聚合酶，需95度加熱5分鐘或98度加熱2分鐘而激活；因此有利于提高擴(kuò)增的特異性，減少非特異性擴(kuò)增和引物二聚體，得到良好的PCR結(jié)果。

•      Taq-D DNA聚合酶具有脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶活性，因此在PCR產(chǎn)物3’末端通常會加上1個多余的腺嘌呤。

• 堿基出錯率是指在每個堿基合成過程中所摻入的錯誤核苷酸數(shù)目。Taq-D DNA聚合酶的堿基錯誤率為1×10^-5。

• 對非熱啟動酶而言，建議在冰上配置PCR 反應(yīng)液后，再放入PCR儀中進(jìn)行擴(kuò)增。這有利于提高擴(kuò)增的特異性，減少非特異性擴(kuò)增，得到良好的PCR結(jié)果。

• 如進(jìn)行PCR擴(kuò)增后，除目的條帶外，還伴隨其他雜帶，建議適當(dāng)減少體系中的酶用量，以增加PCR擴(kuò)增反應(yīng)的特異性

• 本公司Buffer經(jīng)大量PCR反應(yīng)實例優(yōu)化而成，然而對某些PCR反應(yīng)存在一個最you的鎂離子濃度。若需要優(yōu)化鎂離子濃度，請購買本公司不含鎂離子的buffer和MgCl₂/MgSO₄。

     本產(chǎn)品僅限科研實驗使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。

質(zhì)量控制

相關(guān)測試表明無外源內(nèi)切酶或外切脫氧核糖核酸酶污染。PCR方法檢測無宿主殘余DNA，能有效擴(kuò)增人基因組中的單拷貝基因。

室溫放置一周，擴(kuò)增活性無明顯改變；但強(qiáng)烈建議不要在室溫下長期放置，用畢放回-20度。