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5個步驟8個TIPS助你提高轉染效率!

2023-9-6  閱讀(234)

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轉染5步驟:

第一步:獲取目標細胞



第二步:混合和結合



轉移至Lonza認證的電轉杯或電轉板條中



第三步:選擇Nucleofector程序,放入電轉耗材,按下開始按鈕



第四步:用培養基將電轉耗材的細胞轉移出來



第五步:轉移至培養M中。Nucleofectionmm電轉后3-8小時即可檢驗



提高核轉效率8個TIPS:

1.準備好加了新鮮培養基的多孔板,并在實驗前于37°C下預平衡

2.使用傳代次數少并具有推薦融合度或密度(對數生長)的細胞

3.限制胰蛋白酶暴露時間,仔細監測細胞分離情況

4.根據優化方案進行細胞計數并使用適量細胞數;所用細胞過少可能導致細胞死亡率增加

5.采用高質量DNA,使用內毒素去除試劑盒進行純化;請通過測定A260:A280比值檢查各質粒制備液的純度

6.室溫下以離心速度80-100×g和方案規定的時間進行離心

7.離心后加入Nucleofector™溶液,混勻溶液/細胞沉淀制備成單細胞懸液,避免對細胞沉淀進行額外操作或用移液器槍頭抽吸

8.Nucleofection™核轉后,用核轉試劑盒內配的一次性移液管在電轉耗材中的細胞頂部加入約500μL預熱培養基



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