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單細胞鋪板時如何鋪出合格的板子?

閱讀:254        發布時間:2022-9-9
  單細胞鋪板是將一個孔加入少量無血清培養基,晃動浸潤整個孔底,然后用移液槍吸至第二孔,同樣方法浸潤孔底,其它孔依此類推,這樣整個孔底都是濕潤的,細胞懸液會平鋪在整個孔底。
  
  單細胞鋪板的好壞決定了后續實驗的成敗,這個實驗看似簡單,其實也不是那么好做,其中關鍵是要鋪得均勻鋪得平整,其中的操作蘊含著豐富技巧。
  
  要鋪出一個好的板子,必須要做到一下幾點:
  
  1、單細胞重懸
  
  貼壁細胞培養完成后需要將細胞消化收集,并獲得單細胞懸液,但這時候即便消化下來也會連在一起了。這時我們需要注意:消化細胞需要選擇適用的消化液、適當的消化溫度和時間;消化后需要輕輕拍打細胞貼壁面,震落細胞;少量培養基重懸,并用移液器反復吹散細胞。做到這幾點后獲得細胞懸液基本是單細胞懸液。
  
  2、一步完成
  
  獲得細胞懸液后要先根據選擇的培養板的種類,以及要種的細胞密度調整細胞懸液的濃度,可在離心管中調整后反復顛倒搖勻,種板需要一步完成,切不可先加細胞后補液或先加液再補細胞。
  
  3、十字搖勻
  
  細胞種板后將懸液鋪滿整個底面,為防止來回走動導致細胞局部不均勻,放置細胞培養箱內做十字搖勻,搖勻后就不能再移動,直到細胞貼壁方可。
  
  單細胞鋪板需要做到細胞均勻分布,密度適中。正確的鋪板需要獲得單細胞懸液,正確地調整密度,一步到位種植到培養板,通過十字搖法使細胞均勻分布。

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