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轉(zhuǎn)化細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟

閱讀:246          發(fā)布時(shí)間:2017-7-31

研究人員為您解析的轉(zhuǎn)化細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟:
1. 細(xì)胞一定要貼在玻片上(可以放入24孔板),為后面照像打基礎(chǔ)。細(xì)胞密度適中,大約60-75%滿片即可,否則容易脫片。
2. 取出細(xì)胞后用4%多聚甲醛固定15分鐘,現(xiàn)用現(xiàn)配。(以下各步驟切毋使玻片干燥)
3. PBS沖洗
4. 0.1%Triton作用20分鐘
5. PBS沖洗 
6. 10%正常血清封閉10分鐘
7. 加入一抗,4度孵育過夜(找個(gè)小瓶蓋將小玻片支起來,抗體就不容易溢出),還要記住“砸片”,就是抗體從較高處落到片子上,以分布均勻。抗體稀釋度1:60,較常用!
8. PBS沖洗4次,各5分鐘
9加入熒光二抗,室溫30分鐘。抗體稀釋度1:400,較常用!
10.  同8。
11. 90%甘油封片。也很關(guān)鍵阿,多封幾次才有體會。
12. 避光保存轉(zhuǎn)化細(xì)胞,或到顯微鏡下觀察。
Endothelin-1  內(nèi)皮素-1(多肽抗原)    現(xiàn)貨供應(yīng)    規(guī)格:     0.5mg
Endothelin-1 (ET-1)  內(nèi)皮素-1(抗原)    *    規(guī)格:     0.5mg
ERAB   內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Aβ相關(guān)結(jié)合蛋白(抗原)    進(jìn)口/國產(chǎn)    規(guī)格:     0.5mg
ER-Alpha peptide  雌激素受體(多肽抗原)    現(xiàn)貨供應(yīng)    規(guī)格:     0.5mg
TIMP-1(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1)  金屬蛋白酶組織抑制因子-1(抗原)    *    規(guī)格:     0.5mg
轉(zhuǎn)化細(xì)胞

 

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