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DII（細胞膜橙紅色熒光探針）41085-99-8的使用方法
閱讀：1058 發布時間：2021-4-29細胞膜熒光探針染料DiD,DiI,DiO和DiR是一類親脂性熒光染料家族，用于標記細胞膜等脂溶性生物結構和疏水性組織。這是一類環境敏感型熒光染料，當它們與膜結合或者與親脂性生物分子（例如蛋白質，雖然在水中其熒光強度很弱）結合時，其熒光強度顯著增強。它們具有很高的淬滅系數，偏光依賴性和很短的激發壽命。一旦應用于細胞中，這種染料會在細胞內質膜中逐步擴散，導致在其最佳濃度條件下，將整個細胞膜染色。它們不同的熒光顏色：DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細胞多色彩熒光成像分析和流式細胞術提供了一種便捷的工具。
DII(細胞膜橙紅色熒光探針)即DiIC18(3)，可以使用標準的TRITC濾光器。DiI比DiO更亮。DiI通常不會影響細胞的生存力，因此被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經等細胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑(long-termtracer)。被DiI標記的神經細胞在體外培養的條件下可以存活長達4周，在體內可以長達一年。DiI在經過固定的神經元細胞膜上的遷移速率為0.2-0.6mm/day，在活的神經元細胞膜上的的遷移速率為6mm/day。DiI除了簡單的細胞膜熒光標記外，還可以用于檢測細胞的融合和粘附，檢測發育或移植過程中細胞遷移，通過FRAP檢測脂在細胞膜上的擴散，檢測細胞毒性和標記脂蛋白等。
英文名稱：DiIC18(3)
DiI perchlorate
1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate
中文名稱：DiI(細胞膜紅色熒光探針)
1,1'-雙十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚羰花青高氯酸鹽
CAS 號：41085-99-8
分子式：C59H97ClN2O4
分子量：933.86500
Ex/Em：550/567 nm
外 觀：紅色至暗紅色，紫色至深紫色粉末
純 度：≥95%
溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇
廠 家：陜西新研博美生物科技有限公司
請點擊此處進入陜西新研博美生物科技有限公司展臺查看
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結構式：
DiIC18(3) 結構式
應用實測：
本品配成5mM溶液后為紫粉色液體溶液，澄清且無可見異物；進
行熒光染色檢測：工作條件：熒光顯微鏡，C6細胞，400×，工作濃度5μM。
結果：經細胞膜熒光染色，在40倍物鏡下可看到清晰橙紅色熒光。
廠 家：陜西新研博美生物科技有限公司
操作方法
1.染色液制備
（1）配置DMSO或EtOH儲存液：儲存液用DMSO或EtOH配置濃度1～5mM。【注】未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復凍融。
（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5μM的工作液。
【注】工作液最終濃度建議根據不同細胞系和實驗體系來優化。建議從推薦濃度的10倍范圍內開始*濃度的摸索。
2.懸浮細胞染色
（1）加入適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×106/mL。
（2）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養時間不同。可以20min作為起始孵育時間，之后優化體系以得到均一的標記結果。
（3）孵育結束，按1000～1500rpm離心5min。
（4）傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預熱的生長培養液重懸細胞。
（5）重復（3），（4）步驟兩次以上。
3.貼壁細胞的染色
（1）將貼壁細胞培養于無菌蓋玻片上。
（2）從培養基中移走蓋玻片，吸走過量培養液，將蓋玻片放在潮濕的環境中。
（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。
（4）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養時間不同?？梢?0min作為起始孵育時間，之后優化體系以得到均一的標記結果。（5）吸干染料工作液，用培養液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞，孵育5～10min，然后吸干培養基。
4.顯微鏡檢測DiD，DiO，DiI，DiR選擇合適的濾光器觀察。
5.流式細胞儀檢測經DiD，DiO，DiI，DiR染色的細胞可分別用流式細胞儀的FL1，FL2，FL3或FL4通道檢測。