一、雞傳染性法氏囊病檢測(cè)試劑盒

　　二、通用名稱：（實(shí)時(shí)熒光PCR法）

　　三、包裝規(guī)格 50T/盒

　　四、預(yù)期用途：

　　雞傳染性法氏囊病(IBD)又稱甘波羅病，是由呼腸弧病毒引起的一種急性、高度傳染性疾病。本試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光PCR原理，主要用于雞傳染性法氏囊病的定性篩查檢測(cè)及療效評(píng)估有重要指導(dǎo)意義。

　　五、雞傳染性法氏囊病檢測(cè)試劑盒原理：

　　雞傳染性法氏囊病毒檢測(cè)試劑盒針對(duì)雞傳染性法氏囊病基因組高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針，在反應(yīng)體系中含雞傳染性法氏囊病基因組模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號(hào)。利用熒光定量PCR儀對(duì)PCR過(guò)程中相應(yīng)通道信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性分析。

　　六、雞傳染性法氏囊病檢測(cè)試劑盒組成：

　　RT-PCR反應(yīng)液、混合酶液、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照。

 

　　七、儲(chǔ)存及有效期：

　　避光-20℃以下保存，避免反復(fù)凍融，有效期為12個(gè)月。

　　

　　八、適用儀器：ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

 

　　九、注意事項(xiàng)：

　　1.整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書(shū)要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。

　　2.為避免RNA降解，樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。

　　3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。

　　4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。

　　5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。

　　6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。

　　7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。

　　8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。

　　9.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。

 

　　七、樣品DNA的制備

　　用自選方法提取Cps DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PGR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。

　　制備Cps標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照，只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽(yáng)性對(duì)照。

　　1、標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6,5,4,3,2和1號(hào)。

　　2、用帶芯槍頭分別加入45μL超純水(最好用帶芯槍頭，下同)

　　3、先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至0E7拷貝/μL)

　　4、在6號(hào)管中加入5μL10E7拷貝/uL的Cps陽(yáng)性對(duì)照（上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照.