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一、細胞基本屬性

 

組織來源：胰島組織

種屬來源：小鼠

細胞簡介：小鼠胰島細胞分離自胰島組織；是分布于胰外分泌部腺泡間的內分泌細胞團，遍布于胰的各部，分布不均，以胰尾多。胰島大小不等，小的只有幾個細胞，大的有數百個細胞。此外也有零散的內分泌細胞位于腺泡和導管附近。胰島由薄層網狀纖維組成的被膜包被，但被膜并不。胰島的細胞配布成索，細胞索間毛細血管豐富。細胞比腺泡細胞小，呈多邊形和圓形，大小不等，胞質染色淺。核圓，位于細胞中央，染色質顆粒較密。

培養基：MSCM基礎培養基：，FBS，Penicillin，Streptomycin等；

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：梭形、多角形

傳代特性：不建議傳代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

二、細胞培養狀態

發貨時發送細胞電子版照片

三、使用方法

小鼠胰島細胞是一種貼壁細胞，細胞形態呈梭形、多角形，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；

3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

四、注意事項

1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和技術部溝通；由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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