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ELISA酶聯(lián)吸附試驗內源性干擾物質講解
閱讀：57 發(fā)布時間：2025-6-24ELISA（enzyme linked immunosorbent assay）即酶聯(lián)吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法。血清是常用的ELISA試劑盒試驗常用的標本，血漿一般可視為與血清同等的標本，標本引起的假陽性和假陰性結果主要內源性干擾物質具體有哪些方面？
有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質，可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有：類風濕因子、補體、嗜異 性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導的抗鼠Ig ( s )抗體、交叉反應物質和其它物質等。
1、類風濕因子
人血清中IgM、IgG型類風濕因子（RF）可以與ELISA系統(tǒng)中的捕捉抗體及酶標記二抗的FC段直接結合，從而導致假陽性。解決該情況的辦法是：①用F(ab)2替代完整的IgG；②標本用聯(lián)有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效）；③檢測抗原時，可以用2-巰基yi 醇等加入到標本 稀釋液中，使RF降解。
2、補體
ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標記二抗過程中，抗體分子發(fā)生變構，其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來，使C1q 可以將二者連接起來，從而造成假陽性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
3、嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig ( s ) 結合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。解決的辦法是：可在標本稀釋液中加入過量的動 物Ig ( s ) ，但加入量不足或亞類不同時無效。
4、嗜靶抗原的自身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時能與靶抗原結合形成復合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結果。為避免以上情況出現(xiàn)，解決的辦法是：測定前需用理化方法將其解離后再測定。
5、醫(yī)源性誘導的抗鼠Ig ( s )抗體
臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療，用放射性同位素標記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術，均有可能使這些病人體 內產生抗鼠抗體；另外，被鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內也可以產生抗鼠Ig ( s )抗體。這些病人ELISA測定時均可產生假陽性。解決的辦法是：測定抗原時，在標本中加入足量的正常鼠Ig ( s ) ，從而克服由于上述原因造成的假陽性。
6、交叉反應物質
類di高辛、類AFP樣物質等，是與靶抗原有交叉反應的物質。在用多抗測定抗原時對測定結果影響不大，但在用單克隆抗體測定抗原時 ，假如交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應的靶決定簇時，也會出現(xiàn)假陽性結果。
7、標本中其它成分的影響
血清脂質過高、膽紅素、血紅蛋白及粘度過大等，均對ELISA測定結果有干擾作用。
為了避免內源性干擾物質的影響，實驗操作中可以采取以下措施：
1. 樣本稀釋：對于急性感染特異IgM的檢測，可以通過稀釋標本來降低RF的濃度，減少干擾。
2. 改變酶標抗體：使用酶切去除Fc片段的酶標抗體，只保留F(ab')2部分，以避免RF的干擾。
3. 選擇合適的試劑盒：使用要求對標本進行適當稀釋的試劑盒，確保檢測的可靠性。
4. 樣本處理：避免溶血、細菌污染，確保樣本的新鮮和無污染狀態(tài)，減少內源性干擾物質的引入。
這些措施有助于提高ELISA實驗的準確性和特異性，減少假陽性結果的出現(xiàn)。