角質細胞無血清培養基（D-KSFM ）

成分確定的角質形成細胞-SFM是一種無血清培養基，適用于人角質形成細胞的分離和擴增，無需添加牛腦垂體提取物 (BPE) 或者使用成纖維細胞滋養層 (1,2)。BPE的生長促進活性被培養基中加入的生長促進劑所取代，從而使產品具有更為一致的性能。這些生長促進劑還可維持細胞形態、生物標志物和生長特性。該培養基可抑制成纖維細胞的增殖，其鈣濃度很低 (<0.1 mM)，因而可用于高密度未分化角質形成細胞的分離和培養。

放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸（體系中的各組分請按上述列表中的條件進行儲存）

產品使用

1. 本產品僅能用于科研

2. 本產品未通過直接用于活體動物和人的審核

3. 本產品未通過用于活體診斷的審核

運輸和保存

運輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個月；-20℃，避光，保存6個月。

1）復蘇（D-KSFM ）：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查（D-KSFM ）密度。

2）細胞傳代：如果（D-KSFM ）密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。      

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗（D-KSFM ） 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若（D-KSFM ）大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待（D-KSFM ）生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

1.使用（D-KSFM ）時應注意無菌操作，避免污染。

2.本產品含有血清和雙抗，如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可以直接使用。

3.為保持本（D-KSFM ）的優良使用效果，不宜將其長時間放置于室溫或較高的溫度環境中。

4.所有產品請于保質期內使用，超出保質期，必須放棄使用。

5.本產品只供進一步科研使用，不可應用于臨床等其他方面。

6.培養基凍融后，可能會有少量絮狀物析出，不影響（D-KSFM ）正常使用。