大鼠膝關節滑膜成纖維細胞永生化專用培養基

大鼠膝關節滑膜成纖維細胞永生化細胞培養基由團隊精心優化，經過長期測試，本產品可保持大鼠膝關節滑膜成纖維細胞永生化細胞優良的生長狀態。

本產品中已包含大鼠膝關節滑膜成纖維細胞永生化細胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于大鼠膝關節滑膜成纖維細胞永生化細胞的培養。

成纖維細胞培養體系 500 ml

產品主要成分

原代成纖維細胞基礎培養基  440 ml

原代成纖維細胞培養添加劑  5 ml

特級胎牛血清        50 ml

P/S  5 ml

運輸和保存

運輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個月；-20℃，避光，保存6個月。

1）復蘇大鼠膝關節滑膜成纖維細胞永生化細胞培養基：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查大鼠膝關節滑膜成纖維細胞永生化細胞培養基密度。

2）細胞傳代：如果大鼠膝關節滑膜成纖維細胞永生化細胞培養基密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。      

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗大鼠膝關節滑膜成纖維細胞永生化細胞培養基 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若大鼠膝關節滑膜成纖維細胞永生化細胞培養基大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待大鼠膝關節滑膜成纖維細胞永生化細胞培養基生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

1.使用大鼠膝關節滑膜成纖維細胞永生化細胞培養基時應注意無菌操作，避免污染。

2.本產品含有血清和雙抗，如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可以直接使用。

3.為保持本大鼠膝關節滑膜成纖維細胞永生化細胞培養基的優良使用效果，不宜將其長時間放置于室溫或較高的溫度環境中。

4.所有產品請于保質期內使用，超出保質期，必須放棄使用。

5.本產品只供進一步科研使用，不可應用于臨床等其他方面。

6.培養基凍融后，可能會有少量絮狀物析出，不影響大鼠膝關節滑膜成纖維細胞永生化細胞培養基正常使用。