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豬主動脈內皮原代細胞操作注意事項
閱讀：34 發(fā)布時間：2025-7-18在操作豬主動脈內皮原代細胞時，需特別注意以下幾點以確保實驗的穩(wěn)定性和可重復性：
1. 嚴格無菌操作：內皮細胞對微生物污染極為敏感，所有操作應在生物安全柜中進行，并確保培養(yǎng)基、試劑及耗材均經過無菌處理。穿戴無菌手套及口罩，定期用75%酒精擦拭臺面。
2. 輕柔處理細胞：內皮細胞貼壁能力較弱，傳代時需避免過度吹打。建議使用低濃度胰蛋白酶（如0.05% Trypsin-EDTA）消化，并在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，待細胞邊緣輕微卷曲時立即終止消化，加入含血清的培養(yǎng)基中和酶活性。
3. 優(yōu)化培養(yǎng)條件：豬主動脈內皮細胞對培養(yǎng)基成分要求較高，建議使用專用內皮細胞培養(yǎng)基（如EGM-2或DMEM/F12添加20%胎牛血清、1%內皮細胞生長因子）。培養(yǎng)箱需維持37℃、5% CO?及95%濕度，避免頻繁開關培養(yǎng)箱門導致環(huán)境波動。
4. 避免過度傳代：原代內皮細胞傳代次數過多易導致功能退化，建議限制在5代以內，并定期檢測細胞標志物（如vWF、CD31）以確認其表型穩(wěn)定性。
5.凍存與復蘇技巧：凍存時細胞密度應達80%-90%匯合，使用程序降溫盒以1℃/min的速率降溫至-80℃，再轉入液氮長期保存。復蘇時需快速解凍，離心后重懸于預溫培養(yǎng)基，以降低冰晶損傷風險。
6. 功能實驗前的適應性培養(yǎng)：若需進行遷移、成管等實驗，建議提前24小時更換為無血清培養(yǎng)基，以同步細胞狀態(tài)并減少血清干擾。
通過以上細節(jié)控制，可顯著提升豬主動脈內皮原代細胞的存活率及功能表現，為后續(xù)血管生物學研究提供可靠模型。