性做久久久久久坡多野结衣-性做久久久久久久久浪潮-性欲影院-性影院-国产精品线路一线路二-国产精品兄妹在线观看麻豆

實驗材料

    無菌磷酸生理緩沖液(Dulbecco’s phosphate-buffered saline, Ca /Mg free, D-PBS,GibcoBRL 21600-010) 
    trypsin-EDTA solution (0.05% trypsin-0.53mM EDTA-4Na, GibcoBRL 25300-062)：以10 ml 分裝于15 ml 無菌離心管中，保存于–20 oC，使用前放在37℃水槽回溫。 
    新鮮培養基 
    無菌吸管/離心管/培養瓶 
實驗步驟

1 附著型胞(adherent cell) 
    1.1 吸掉舊培養液。 
    1.2 用D-PBS 洗滌細胞一至二次。 
    1.3 加入trypsin-EDTA 溶液(1ml/25cm2, 2ml/75cm2)，37 oC 作用數分鐘，于倒立顯微鏡下觀察，當細胞將要分離而呈現圓粒狀時，吸掉trypsin-EDTA 溶液。(若不移去trypsin-EDTA，則在trypsin-EDTA 作用后，加入適量含血清之新鮮培養基終止trypsin 作用，離心后再吸掉上清液。) 
    1.4 輕拍培養瓶使細胞自瓶壁脫落，加入適量之新鮮培養基，以吸管上下吸放數次以打散細胞團塊，混和均勻后，依稀釋比例轉移至新的培養瓶中，以正常培養條件培養。 
2 懸浮型細胞(suspension cell) 
    2.1 吸出細胞培養液，放入離心管中，離心1000 rpm 5 分鐘。 
    2.2 吸掉上清液，加入適量之新鮮培養基，混和均勻后，依稀釋比例轉移至新的培養瓶中，以正常培養條件培養。 
3 融合瘤(hybridoma) 
    3.1 有些hybridoma cell 需培養三天以上才會產生抗體，若是更換培養基，則可能會失去抗體。因此繼代培養不需離心后更換培養基，直接添加新鮮培養基稀釋細胞濃度即可。若體積太大，可傾斜放置，或分殖至新培養瓶中。