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艾美捷核糖核酸酶 A測定方案說明書

時間:2023/2/1閱讀:193
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核糖核酸酶A是內切核糖核酸酶,可特異地攻擊RNA上嘧啶殘基的3'端,切割與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵。反應終產物是嘧啶3'磷酸及末端帶嘧啶3'磷酸的寡核苷酸。無輔因子及二價陽離子存在時,核糖核酸酶A的作用可被胎盤RNA酶抑制劑(B1ackburn et al.1977)或氧釩—核糖核苷復合物(Puskas et al.1982)所抑制。 

 

艾美捷科核糖核酸酶 AWBC-LS003435技術說明

應特別注意酶的處理,因為它與玻璃表面的親和力。該酶保持活性,但在凍干時聚集,并在低離子強度的溫度≥2°C的溶液中聚集。RNase A的加熱溶液使DNA酶失活可能不令人滿意,因為如果發生沉淀形成并且熱處理的DNase可能會隨著時間的推移重新激活,RNA酶活性可能會喪失。代碼: RPDF 適用于需要最-低 DNase 和蛋白酶水平且無需進一步處理的應用。代碼: RAF在某些應用中無需處理即可使用。要熱處理 RAF,請使用 10mM 乙酸鹽 pH 5.0 和或不帶 15mM CaCl 2 在 15°C 或更長時間下在 100°C 下 80 分鐘。 如果在中性pH下加熱,可能會沉淀。代碼的熱處理:由于磷酸鹽的存在,RASE會沉淀。  

 

核糖核酸酶A測定

方法

由于反應發生的速率不同以及從生物來源分離的RNA中核苷酸模式的顯著差異,核糖核酸酶活性的標準化一直很困難。克魯克等.(1960)發表了一種使用合成底物胞苷2',3'-磷酸的測定。Zimmerman和Sandeen(1965)描述了使用聚胞苷酸的靈敏測定。

卡爾尼茨基等人的方法。(1959)在沃辛頓使用。pH 5.0 下酵母 RNA 的水解速率是通過測量在規定條件下釋放的酸溶性寡核苷酸的量來確定的。一個單位導致吸光度在 A 時增加 1.0260在37°C和pH 5.0的特定條件下。

試劑

0.10 M 醋酸鈉緩沖液,pH 5.0

25%高氯酸,含0.75%乙酸鈾酰

1%沃辛頓酵母RNA在0.10M乙酸鈉中,pH 5.0。測定前平衡至37°C。

在試劑級水中以 1 mg/ml 制備儲備溶液。在測定前,在pH 2.4的6.0M乙酸鈉中進一步稀釋至每毫升10,5和0微克。

程序

將一毫升相應的酶稀釋液移入離心管中。包括含有一ml 0.10 M乙酸鈉緩沖液,pH 5.0的空白。將所有試管在 37°C 下孵育 5-8 分鐘。每隔一段時間,加入一毫升1%的RNA。將每個試管孵育4分鐘,并通過加入一ml乙酸鈾酰-高氯酸溶液停止反應。轉移到冰浴中冷卻5分鐘。通過離心澄清并用試劑級水將0.1ml透明上清液稀釋至3.0ml。閱讀 A260與空白。

 

核糖核酸酶 A部分引用文獻:

Aktipis, S. and Iammartino, A.

Photochemical Modification of Aromatic Residues in Irradiated Ribonuclease , Biochim Biophys Acta 278 , 239 , 1972

Allewell, N. and Sama, A.

The Effect of Ammonium Sulfate on the Activity of Ribonuclease A , Biochim Biophys Acta 341 , 484 , 1974

Alonso, J. , Nogues, M. and Cuchillo, C.

Modification of Bovine Pancreatic Ribonuclease A with 6-Chloropurine Riboside , Arch Biochem Biophys 246 , 681 , 1986

 

核糖核酸酶 A相關研究

無核酸酶白蛋白 脫氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF) 組蛋白 (H, NHL) 溶菌酶 (LY/LYSF) 微球菌核酸酶 (NFCP) 核酸酶,S1 (中新/中核酸) 核酸,DNA,大腸桿菌,λ/片段,RNA磷酸酶,堿性(CAP/BAPF/BAPC/BAPSF/PC)磷酸二酯酶 I (VPH) 磷酸二酯酶 II (SPH) 蛋白酶 K (PROK/PROKS)逆轉錄酶,重組 HIV (RTHIV) 核糖核酸酶 T1,無動物源性 (RT1S)  


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