Elevated cathepsin enzyme activity in serum or the extracellular matrix can signify a number of pathological conditions. ICT’s Magic Red assay kits are used by researchers seeking to quantitate and monitor cathepsin activity in cultured cells and tissues. This assay kit detects cathepsin-B activity. To use Magic Red, add the substrate directly to the cell culture media, incubate, and analyze. Because it is cell permeant, it easily penetrates the cell membrane and the membranes of the internal cellular organelles – no lysis or permeabilization steps are required. If cathepsin enzymes are active, the Magic Red substrate is cleaved and the cresyl violet fluorophore will become fluorescent upon excitation. As enzyme activity progresses and more Magic Red substrate is cleaved, the signal will intensify, allowing researchers to watch the color develop over time. Samples can be analyzed by fluorescence microscopy or with a fluorescence plate reader. Hoechst 33342 and Acridine Orange are included in the kit to detect nuclear morphology and lysosomal organelle structure, respectively.

血清或細(xì)胞外基質(zhì)中組織蛋白酶活性升高可表示多種病理狀況。艾美捷ICT魔力紅組織蛋白酶B活性分析試劑盒被研究人員用來定量和監(jiān)測培養(yǎng)細(xì)胞和組織中的組織蛋白酶活性。

該試劑盒檢測組織蛋白酶B活性。要使用魔力紅，將基質(zhì)直接添加到細(xì)胞培養(yǎng)基中，孵育并分析。因為它是細(xì)胞滲透性的，它很容易穿透細(xì)胞膜和內(nèi)部細(xì)胞器的膜——不需要裂解或滲透步驟。如果組織蛋白酶是活性的，魔紅底物被裂解，甲酰紫熒光團將在激發(fā)時變?yōu)闊晒狻ｋS著酶活性的進(jìn)展和更多魔紅底物的裂解，信號將增強，使研究人員能夠觀察顏色隨時間的變化。樣品可通過熒光顯微鏡或熒光板讀取器進(jìn)行分析。試劑盒中包括Hoechst 33342和吖啶橙，分別用于檢測核形態(tài)和溶酶體細(xì)胞器結(jié)構(gòu)。

艾美捷ICT魔力紅組織蛋白酶B活性分析試劑盒：

試劑名稱MR-RR2

靶向組織蛋白酶B

激發(fā)/發(fā)射592 nm/628 nm

熒光板讀數(shù)器、熒光顯微鏡的分析方法

樣品類型細(xì)胞培養(yǎng)

儲存2-8°C

艾美捷ICT魔力紅組織蛋白酶B活性分析試劑盒注意事項：

準(zhǔn)備樣品和對照品

通過加入DMSO重新配制魔力紅。

通過加入diH2O稀釋魔力紅1:10。

向每個樣品中加入20µL魔紅（約500µL培養(yǎng)細(xì)胞等分試樣）。

避光培養(yǎng)。

觀察顏色在15分鐘內(nèi)開始顯現(xiàn)。

如果需要，用其他污漬標(biāo)記，如Hoechst、DAPI或抗體。

如果需要，修復(fù)單元格。

用熒光顯微鏡或熒光板讀取器進(jìn)行分析。魔力紅的最佳激發(fā)波長為592nm，發(fā)射波長為628nm。

如果使用貼壁細(xì)胞，請參閱手冊了解其他方案。