組蛋白3（H3）位于細(xì)胞核內(nèi)，與染色質(zhì)結(jié)合。與H2A、H2B和H4一起存在于核小體中。

一起來看一下下面的3組應(yīng)用實(shí)例：

1.2μg擬南芥染色質(zhì)富集部分（1）和4周齡擬南芥葉片（2）中的3.75μg總蛋白，在12%SDS-PAGE上分離并在Immobilon-P（微孔，半干）PVDF膜上印跡50分鐘。在室溫下攪拌轉(zhuǎn)移至MTBS-T（5%牛奶）30分鐘后，立即阻斷印跡。在室溫下攪拌，將印跡在1:5000稀釋的一級(jí)抗體中培養(yǎng)1小時(shí)。傾析抗體溶液，短暫沖洗印跡兩次，然后在室溫下攪拌在TBS-T中洗滌3次，持續(xù)3分鐘。在二級(jí)抗體（抗IgG辣根過氧化物酶結(jié)合物，來自Agrisera，AS09 602）中培養(yǎng)印跡，在室溫下攪拌稀釋至1:20 000 30分鐘。按照上述方法清洗印跡，并按照制造商的說明用ECL檢測試劑顯影5分鐘。曝光時(shí)間為30秒。在肽中和試驗(yàn)中，用于誘導(dǎo)H3抗體的肽在染色質(zhì)富集部分（1）中的雙帶已被超越。染色質(zhì)izolation如前所述（Zilberman et al.2008）進(jìn)行，并進(jìn)行了少量修改。

用15%SDS-PAGE分離30μg 5µl飽和8M尿素中的衣原體Reinharddi蛋白，并用濕轉(zhuǎn)移系統(tǒng)在100V下印跡1h至0.2µm硝化纖維素。用0.5%冷魚膠在室溫下攪拌，將斑點(diǎn)封閉1h。將印跡在原代抗體（抗H3）中，稀釋1:2500，在RT下攪拌1小時(shí)。用3X 15min TBS-TT在RT攪拌下清洗斑點(diǎn)。在第二抗體（日光800）1:5000稀釋中孵育30min，攪拌30min，用TBSTT沖洗1X 15min，1X與TBST一起清洗15min，然后用ODyssey IRD掃描儀掃描。

根據(jù)前面描述的方法進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)分析（Rybaczek和Maszewski 2006）。將蠶豆根尖部分（1.5mm長）在PBS緩沖液（3.7%多聚甲醛）中固定45 min（18℃），用PBS洗滌數(shù)次，置于檸檬酸緩沖消化液（pH 5.0；37℃45分鐘），含2.5%果膠酶（Fluka），2.5%纖維素酶（Onozuka R-10；Serva）和2.5%果膠酶（ICN）。去除消化液后，在PBS中清洗根尖3次，用蒸餾水沖洗，并壓碎在Super Frost Plus玻片上（Menzel Gl?ser）。將風(fēng)干載玻片用PBS緩沖5%BSA在20℃下預(yù)處理50分鐘，并在加濕空氣（4℃）中與針對H3組蛋白（Agrisera）培養(yǎng)的兔抗體一起培養(yǎng)過夜，將其溶解在含有1%BSA的PBS中（以1:50的稀釋度）。孵育后，用PBS洗滌載玻片3次，并用Agrisera二級(jí)山羊抗兔IgG DyLight®488抗體（AS09 633，1:1000）孵育1h（18℃）。核DNA用4′，6-二氨基-2-苯基吲哚（DAPI，0.4μg/ml）染色；西格瑪-奧爾德里奇）。在用PBS洗滌后，將載玻片風(fēng)干并嵌入Vectashield熒光安裝介質(zhì)中（Vector Laboratories）。使用配備有B-2A濾光片（藍(lán)光；λ ≈ 495nm），用于DyLight共軛抗體和UV-2A濾光片（UV光；λ ≈ 365 nm）用于DAPI。所有的圖像都是在*相同的時(shí)間用dxm1200ccd相機(jī)記錄下來的。

Agrisera公司提供1000種用于植物和藻類細(xì)胞生物學(xué)研究的一抗，2000多種二抗。Agrisera公司提供的植物領(lǐng)域的抗體涵蓋擬南芥、萊茵衣藻、藍(lán)藻、松柏類、硅藻、大豆、大麥、蒺藜苜蓿、煙草、稻、菜豆、小立碗蘚、楊樹、豌豆、番茄、馬鈴薯、菠菜、小麥、玉米、葡萄等多個(gè)物種。艾美捷科技是Agrisera的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的組蛋白H3（兔抗體）。