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臺(tái)盼藍(lán)染色法具體操作步驟:

時(shí)間:2025-6-12閱讀:183
臺(tái)盼藍(lán)染色法是一種簡(jiǎn)單快速檢測(cè)細(xì)胞活性的方法,以下是其具體操作步驟:


  1. 準(zhǔn)備工作

    • 配制適量的臺(tái)盼藍(lán)染液,一般使用 0.4% 的臺(tái)盼藍(lán)溶液,可將 0.4 克臺(tái)盼藍(lán)粉末溶解于 100 毫升磷酸緩沖鹽溶液(PBS)中,過(guò)濾除菌后備用。

    • 準(zhǔn)備好細(xì)胞懸液,確保細(xì)胞懸液濃度適中,若細(xì)胞濃度過(guò)高,需進(jìn)行適當(dāng)稀釋。

  2. 染色

    • 取適量細(xì)胞懸液(如 100 微升),加入等體積的臺(tái)盼藍(lán)染液(100 微升),輕輕吹打混勻,使細(xì)胞與染液充分接觸,室溫下染色 3 - 5 分鐘。

  3. 觀察與計(jì)數(shù)

    • 取少量染色后的細(xì)胞懸液,滴加到血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上,蓋上蓋玻片。

    • 在顯微鏡下觀察,活細(xì)胞由于細(xì)胞膜具有完整性,能夠排斥臺(tái)盼藍(lán),因此不著色,呈現(xiàn)透明狀;而死細(xì)胞的細(xì)胞膜失去完整性,臺(tái)盼藍(lán)可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),使細(xì)胞染成藍(lán)色。

    • 選擇計(jì)數(shù)板上合適的區(qū)域進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),一般選取四個(gè)角的大方格和中央的大方格進(jìn)行計(jì)數(shù)。分別記錄活細(xì)胞(無(wú)色)和死細(xì)胞(藍(lán)色)的數(shù)量。

  4. 計(jì)算細(xì)胞活性

    • 根據(jù)以下公式計(jì)算細(xì)胞活性:細(xì)胞活性(%)=(活細(xì)胞數(shù) / 細(xì)胞總數(shù))×100%。例如,計(jì)數(shù)得到活細(xì)胞數(shù)為 400 個(gè),死細(xì)胞數(shù)為 100 個(gè),則細(xì)胞總數(shù)為 500 個(gè),細(xì)胞活性 =(400/500)×100% = 80%。



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