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Bio-Rad 1658033 小型垂直電泳轉(zhuǎn)印系統(tǒng)科研應(yīng)用指南

時間:2025-4-17閱讀:512

Bio-Rad 1658033 小型垂直電泳轉(zhuǎn)印系統(tǒng)科研應(yīng)用指南


——高效、緊湊的蛋白/核酸分離與轉(zhuǎn)印一體化解決方案

一、系統(tǒng)核心特性與創(chuàng)新設(shè)計

1.1 模塊化組件設(shè)計

電泳槽:

最大支持 10 cm × 10 cm 凝膠(2塊,厚度0.5-1.5 mm)

冷卻芯設(shè)計(溫升<5℃/小時,200V條件下)

轉(zhuǎn)印模塊:

半干轉(zhuǎn)/濕轉(zhuǎn)雙模式切換

最大轉(zhuǎn)印效率:>90%(測試蛋白10-150 kDa)

1.2 關(guān)鍵性能參數(shù)

參數(shù)1658033系統(tǒng)常規(guī)小型系統(tǒng)

最大電壓500 V300 V

運行時間(SDS-PAGE)35分鐘(200 V)50-60分鐘

轉(zhuǎn)印面積20 cm210-15 cm2

緩沖液需求量300 mL(電泳)500 mL

1.3 適用研究場景

推薦應(yīng)用:

? 快速蛋白篩查(如CRISPR編輯驗證)

? 低豐度核酸檢測(Northern blot)

? 教學實驗室高通量操作

二、標準化操作流程

2.1 電泳步驟

復制

1. 凝膠安裝:

- 將預(yù)制膠卡入槽體,加入1×Running Buffer

- 避免緩沖液溢出(液面超過電極1 cm)

2. 上樣:

- 使用10 μL上樣槍頭(最大上樣量25 μL/孔)

3. 運行:

- 初始電壓80 V(濃縮膠),進入分離膠后調(diào)至120-150 V

2.2 半干轉(zhuǎn)印方案

步驟條件注意事項

膜/濾紙預(yù)處理浸漬轉(zhuǎn)印緩沖液10秒避免氣泡滯留

"三明治"組裝負極→濾紙/膠/膜/濾紙→正極戴手套操作

轉(zhuǎn)印參數(shù)15 V, 30分鐘分子量>100 kDa需延長至45分鐘

三、性能優(yōu)化與問題排查

3.1 電泳質(zhì)量評估

合格標準:

? 蛋白Marker條帶清晰(無彌散)

? 前沿指示劑(溴酚藍)呈直線遷移

3.2 轉(zhuǎn)印效率驗證

Ponceau S染色法:

復制

1. 轉(zhuǎn)印后膜用0.1% Ponceau S染色5分鐘

2. 脫色后觀察:

- 合格:所有目標條帶可見

- 失敗:高分子量蛋白缺失(需延長轉(zhuǎn)印時間)

3.3 常見問題診斷

現(xiàn)象可能原因解決方案

條帶彎曲緩沖離子強度不均新鮮配制Running Buffer

轉(zhuǎn)印后信號弱甲醇濃度過高(>20%)降低至10%甲醇

凝膠熔融電流過高/冷卻失效檢查冷卻循環(huán)系統(tǒng)

四、技術(shù)問答(Q&A)

Q1:能否用于非變性蛋白電泳?

需改用 Native PAGE緩沖液套裝(Cat. 1610738),并取消SDS

Q2:最小檢測蛋白量?

配合高敏發(fā)光底物(如Clarity Max)可檢測 0.5 pg/band

文檔優(yōu)化建議:

插入 【電泳-轉(zhuǎn)印工作流程圖】 標注關(guān)鍵參數(shù)

添加 緩沖液配方二維碼(鏈接至Bio-Rad數(shù)據(jù)庫)

關(guān)鍵步驟用 ??警示框 強調(diào)(如"勿使用氯化鈉緩沖液")



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