美國Biozellen-3D細胞培養凝膠試劑盒產品

產品基本信息

本公司今日報道：

• 中文名稱：3D細胞培養凝膠試劑盒

• 英文名稱：3D cell culture Kit

• 貨號：KC7186

• 保存條件：室溫

產品概述

本3D細胞培養凝膠試劑盒所包含的生物活性凝膠，能夠高度模擬活體內三維組織的微環境與形態結構。它為細胞的體外培養以及體內實驗提供了近似于體內細胞外基質的三維立體微環境，有力支持各種細胞的三維生長。

該凝膠的主要成分是多糖和人工多肽，具有諸多顯著優勢。其不含抗原物質和動物源性成分，從根本上杜絕了免疫原性的風險。產品成分穩定且明確，批次間差異極小，這使得實驗具有ji高的可重復性。

在操作方面，本產品極為簡便。僅需在室溫下操作，無需像其他產品那樣在冰上進行復雜的處理。而且，它可以直接使用，無需進行稀釋或額外添加其他成分。僅需簡單的2個步驟，經過5-10分鐘的孵育，即可成功形成細胞-凝膠的三維結構。

此外，該凝膠對剪切力敏感，能夠直接進行體內原位注射，無論是與細胞混合還是不混合的情況下，都能無縫對接體內外實驗，為開展動物實驗提供了極大的便利。細胞培養結束后，還可回收培養。試劑盒附贈溫和裂解液，裂解或降解后的成分僅為單糖和氨基酸，對細胞無任何不良影響。

從觀察角度來看，該凝膠具有高透光性和高通透性的特點，方便研究人員通過熒光觀察、顯色觀察等多種方式對細胞進行實時跟蹤觀察。

操作說明書

1. 預熱凝膠液：使用前，將凝膠液預熱至37℃，為后續與細胞懸液的混合做好準備。

2. 混合凝膠液與細胞懸液：在離心管中，將凝膠液和細胞懸液輕輕混勻。可輕柔快速地進行斡旋操作，時間控制在1分鐘內，重復1-2次。特別注意，在凝膠和細胞混合時，必須嚴格按照說明書的要求，先吸取凝膠，再往凝膠中加入細胞懸液，然后進行混勻，順序絕對不可顛倒。同時，斡旋時間不能超過1分鐘，斡旋次數不能超過3次，因為過度斡旋會破壞細胞膜，并增加凝膠中的氣泡，從而嚴重影響細胞培養效果。建議的終細胞濃度為4.2x10^5/ml-1x10^6/ml。不同的培養體系可參照以下表格確定各成分的體積：
        |孔板類型|凝膠液體積|細胞懸液體積|培養基體積|
        | ---- | ---- | ---- | ---- |
        | 96孔板| 30ul /孔| 30ul /孔| 80ul /孔|
        | 24孔板| 150ul /孔| 150ul /孔| 400ul /孔|
        | 12孔板| 300ul /孔| 300ul /孔| 800ul /孔|
        | 6孔板| 600ul /孔| 600ul /孔| 1600ul /孔|

3. 潤洗與鋪展：用1xpbs潤洗細胞培養板，建議至少在凝膠形成前20分鐘進行潤洗操作。潤洗后，快速將凝膠細胞混合物貼壁加入培養板中，并在四周輕輕晃動培養板，使凝膠細胞混合物均勻鋪展。

4. 凝膠形成：將培養板置于37℃環境下孵育5-30分鐘，以形成穩定的凝膠結構。

5. 添加培養液與培養：孵育完成后，沿孔壁緩慢加入培養液。隨后，將培養板置于37℃、5% CO2的條件下培養24小時。在此期間，應避免晃動培養板，以免破壞凝膠結構。

6. 換液操作：24小時后進行半換液操作，即用移液槍輕輕吸取上層細胞培養液的1/2，再添加等量的新鮮培養液。此后，可根據細胞的生長情況進行正常換液。特別注意，換液時一定要緊貼培養孔壁，小心吸取，避免吸掉剛貼附好的細胞。

實驗中可能出現的問題及解決方法

1. 氣泡問題：若在運輸過程中出現氣泡，可將凝膠放置在4℃冰箱中，氣泡可自行消除。如需快速消除氣泡，可采用微波加熱30s的方法。為避免在使用過程中產生氣泡，建議使用1mL無菌注射器（去針頭使用）輕吸凝膠注入EP管中，也可以使用經PBS潤洗的1mL槍頭吸取凝膠，再將細胞懸液加入后上下輕輕吹打進行混勻。

2. 細胞適應問題：對于2D培養的細胞接種到凝膠中，通常需要2-4天的時間來適應凝膠的三維環境。在這期間，細胞的生長狀態可能會比較保守，多呈圓形。之后，細胞會逐漸恢復正常生長，可進行后續實驗。

3. 細胞遷移問題：為避免一些類型的細胞從凝膠中遷移到培養皿底部貼壁，在鋪板前，可先將孔板包被一層薄薄的凝膠。具體方法是將凝膠和培養液按照1:1的體積比配置，鋪在孔板底部，待其凝固之后，再鋪凝膠細胞混合液。

細胞收集與再培養

1. 回收凝膠中的細胞：棄掉培養液，并用裂解液沖洗培養孔板。加入凝膠液5倍體積的裂解液，輕輕吹打數次，在室溫下裂解約10分鐘，使凝膠wan全變成液體狀態。將混合液收集到離心管中，用PBS沖洗孔板，并將沖洗液也收集至上述離心管中。然后，以1500 rpm的轉速離心3分鐘，即可收集到細胞。如果細胞在凝膠內是成團生長的，可以在裂解時適當加大裂解液體積，并延長裂解時間，以得到分散的單個細胞。

問題集

1. 3D細胞培養后如何染色？
        答：3D細胞培養后可以直接在膠中進行染色，染色步驟與2D培養的細胞相同，不需要進行特殊處理。

2. 3D細胞培養后怎么觀察？
        答：3D細胞培養后可以使用Confocal或者熒光倒置顯微鏡進行觀察，光學顯微鏡也可以觀察，但是由于凝膠是立體結構，可能光學顯微鏡觀察的效果不會太理想。

3. 你們的3D細胞培養凝膠能進行培養嗎？
        答：可以。

4. 你們的3D細胞培養凝膠使用時需要使用配套的專用耗材或者儀器嗎？
        答：不需要使用專用耗材和儀器。采用本試劑盒進行3D細胞培養時所用的耗材和儀器同2D培養。

5. 你們的3D細胞培養凝膠試劑盒可以用于細胞共培養嗎？
        答：可以進行細胞共培養。

6. 你們的3D培養凝膠試劑盒是不是只能培養特定的一些細胞？
        答：本試劑盒對細胞沒有選擇性，對大多數細胞都是適用的。

7. 你們的3D培養凝膠試劑盒和Matrigel基質膠有何不同？
        答：Matrigel基質膠主要是由層粘連蛋白、Ⅳ型膠原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白等組成，是從腫瘤中提取出來的，成分復雜。本試劑盒凝膠主要是由多肽和多糖構成，為全人工合成的，無動物源性。適用Matrigel基質膠進行3D培養，其后期染色非常困難，細胞也無法回收。使用本試劑盒進行3D培養后的細胞可以輕松染色，并可以在保持細胞活性的情況下回收細胞，是您3D培養的理想選擇。

8. 你們的3D培養凝膠和軟瓊脂一樣嗎？
        答：我們的3D培養凝膠是人工合成的，其性能大大優于軟瓊脂。

9. 凝膠和細胞懸液混合這一步，是否有順序要求？
        答：有。必須嚴格按照說明書，先吸取凝膠到容器中，再往凝膠中加入細胞懸液，混勻。順序不可顛倒。否則不利于形成穩定的凝膠結構。

10. 使用中如何吸取凝膠？
         答：先將槍頭jian端剪掉，用PBS潤洗，然后再吸取凝膠。慢慢松開移液槍的按鈕，按鈕彈回原位之后，讓槍頭在凝膠液面以下稍多停留一會兒，再提槍，轉移凝膠到其他容器中。

11. 吸取凝膠與混勻凝膠過程中，產生的氣泡可否消除？
         答：吸取與混勻凝膠過程中產生的氣泡不能消除，會影響后續實驗，所以，應盡量避免氣泡產生。

12. 怎樣達到更好的鋪板效果？
         答：鋪板前，采用分區域逐滴滴加的方式，把每一滴凝膠按一定排布次序滴在孔（或皿）的不同區域，滴好之后，用槍頭在凝膠表面輕輕引流，可獲得較為均勻的鋪板結果。鋪板后將培養板靜置孵育5-30min，期間不要晃動培養板。

13. 何時添加培養液？
         答：37℃恒溫培養箱中孵育5-30min形成穩定凝膠結構后即需要添加培養液。將培養液貼壁緩慢加入孔板中。

14. 培養過程中需要如何換液？
         答：換液時注意先將負壓泵壓力調低。在培養48小時之后再進行換液。換液時，棄掉2/3左右的舊液即可，留少量舊液以避免吸走凝膠；對于生長快的細胞，24h時可以換掉一半培養液。換液時一定要緊貼培養孔壁，小心緩慢吸取舊液，避免吸掉剛貼附好的細胞。添加新液一定要貼壁、緩慢加入，以避免沖壞凝膠。此后可根據細胞生長速度，視培養液的消耗情況來換液。