原代BMDM細胞轉染技術分享及5AZA調節腫瘤免疫微環境機制研究

研究背景 

5-aza-2'-脫氧胞丁胺（5AZA）作為DNA甲基轉移酶（DNMT）抑制劑，可激活腫瘤適應性免疫并抑制腫瘤進展，但其調控腫瘤免疫微環境的分子機制尚未wan全闡明。本研究聚焦于結直腸癌（CRC）腹膜癌（PC）免疫微環境，探討5AZA的作用機制。 

研究方法與結果 

通過流式細胞術、實時PCR、Western印跡及藥物親和力響應靶標穩定性（DARTS）技術，發現5AZA可誘導巨噬細胞向M1樣表型極化，增強p65磷酸化及IL-6表達，進而激活轉移前脂肪組織中的T細胞，抑制免疫功能小鼠模型中的CRC-PC。機制研究表明，ATP結合盒轉運蛋白A9（ABCA9）是5AZA的直接作用靶點，其通過依賴ABCA9的方式誘導膽固醇積累，激活NF-κB通路。藥理學抑制NF-κB或敲除IL-6可消除5AZA的抗腫瘤效應。此外，5AZA與常規化療藥物（5-Fu或OXP）聯用可協同增強抗腫瘤效果。臨床樣本驗證顯示，5AZA可重編程CRC患者基質巨噬細胞及T細胞的抗腫瘤免疫功能。 

轉染方法總結（原代BMDM細胞siRNA轉染） 

采用ZETA life Advanced DNA RNA轉染試劑（#AD600150）進行ABCA9 siRNA轉染，具體步驟如下： 

1. **細胞接種**：將原代BMDM巨噬細胞以2.5×10? cells/孔密度接種于6孔板，待細胞密度達70%時進行轉染。 

2. **轉染復合物制備**：室溫下將10 µL siRNA（100 pmol/mL）與10 µL轉染試劑混合，孵育15分鐘。 

3. **轉染操作**：將復合物加入含1 mL正常DMEM培養基的孔中，孵育24小時后更換新鮮DMEM培養基繼續培養，后續收集細胞用于檢測。 

引用產品與技術優勢 

**熱門產品**： 

- AD600150：Advanced DNA RNA轉染試劑（適用于難轉染細胞） 

- AV500150：小動物活體轉染試劑 

- P400150：Sirius DNA轉染試劑 

- 胎牛血清（烏拉圭血源Z7181FBS-500、澳洲血源Z7010FBS-500） 

- 雙抗（BM0001-100）、0.25%胰酶（BM0002-100） 

**ZETA life第三代轉染技術優勢**： 

1. **低毒性**：多肽小分子轉染試劑可快速代謝，無細胞毒性。 

2. **廣譜適用性**：有效轉染免疫細胞（如THP-1、RAW264.7、原代BMDM）、懸浮細胞、干細胞及原代細胞（如肝細胞、子宮內膜細胞等）。 

3. **高兼容性**：已成功應用于多種細胞類型（如腫瘤細胞、間充質干細胞）的基因沉默與過表達研究，相關成果發表于 *Theranostics*（IF=12.40，DOI: 10.7150/thno.66420）等高水平期刊。 

 結論 

本研究shou次揭示5AZA通過ABCA9依賴的膽固醇代謝重編程巨噬細胞，激活T細胞抗腫瘤免疫，為腫瘤免疫治療提供了新靶點。ZETA life轉染試劑在原代細胞及難轉染細胞中的高效性，為機制研究提供了關鍵技術支撐，推動了腫瘤免疫微環境領域的深入探索。