本試劑盒針對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞、組織開發(fā)的裂解液DC，在10 分鐘內(nèi)完成細(xì)胞和組織的裂解、提取和純化。使用高效硅基DNA 純化柱，高效結(jié)合基因組DNA，從而獲得純度高，產(chǎn)量高的基因組DNA。提取的基因組DNA 完整性高，適合PCR、qPCR、酶切、克隆、Southern 雜交、文庫(kù)構(gòu)建等。本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。

保存條件

室溫保存一年。

自備材料

水浴鍋或金屬浴、無(wú)水乙醇、無(wú)DNase 無(wú)RNase 離心管、RNaseA（10mg/mL，或貨號(hào)QR0101）。

使用方法

1. 樣本處理

1.1 從動(dòng)物組織中提取DNA

1.1.1 取20-100mg 樣本放入液氮中充分研磨，加入700μL 裂解液DC，充分混勻，室溫作用1 分鐘。

或取20-100mg 樣本加入700μL 裂解液DC，加入1 顆鋼珠，放入組織研磨器中，研磨1-2 分鐘。

備注：不同樣本中DNA 含量差異很大，過(guò)多使用樣本容易導(dǎo)致堵塞，最終導(dǎo)致DNA 提取量下降。

1.1.2 55℃孵育1 分鐘。

1.1.3 12,000rpm 離心1 分鐘。取500μL 上清。

1.1.4 （選做）加入5μL RNase A（10mg/mL），室溫靜置5-10 分鐘。

1.1.5 加入250μL 無(wú)水乙醇，充分混勻。按照步驟2.1-2.7 操作。

1.2 從細(xì)胞中提取DNA

1.2.1 懸浮細(xì)胞1,000rpm 離心5 分鐘，收集細(xì)胞沉淀。

或者貼壁細(xì)胞經(jīng)過(guò)胰酶消化后1,000rpm 離心5 分鐘，收集細(xì)胞沉淀。

1.2.2 細(xì)胞數(shù)量<5×106 個(gè)時(shí)，加入500μL 裂解液DC。細(xì)胞數(shù)量為5×106~1×107 個(gè)時(shí)，加入700μL 裂

解液DC。輕輕吹打混勻，55℃孵育1 分鐘。

1.2.3 12,000rpm 離心1 分鐘。

1.2.4 細(xì)胞數(shù)量<5×106 個(gè)時(shí)，取450μL 上清。細(xì)胞數(shù)量為5×106~1×107 個(gè)時(shí)，取650μL 上清。

1.2.5（選做）加入5μL RNase A（10mg/mL），室溫靜置5-10 分鐘。

1.2.6 加入0.5 倍體積無(wú)水乙醇，充分混勻。按照步驟2.1-2.7 操作。

2. DNA 純化

2.1 全部轉(zhuǎn)移到DNA 吸附柱中，12,000rpm 離心1 分鐘，倒掉收集管中廢液。

2.2 向DNA 吸附柱中加入500μL 洗滌液DCW1，12,000rpm 離心30 秒，倒掉收集管中廢液。

2.3 向DNA 吸附柱中加入500μL 洗滌液DCW2，12,000rpm 離心30 秒，倒掉收集管中廢液。

2.4 重復(fù)步驟2.3 一次。

2.5 12,000rpm 離心2 分鐘，倒掉收集管中廢液。

2.6 將DNA 吸附柱放入新無(wú)DNase 和無(wú)RNase 離心管，加入30-50μL 洗脫液C，室溫放置1 分鐘。

2.7 12,000rpm 離心2 分鐘，得到DNA 溶液，-80℃保存。

注意事項(xiàng)

1. 經(jīng)常更換手套，防止DNA 污染。

2. 使用無(wú)DNase 無(wú)RNase 的吸頭和離心管，防止DNA 降解。

3. 常更換吸頭，防止交叉污染。

4. 動(dòng)作輕柔，防止基因組DNA 斷裂。

5. 為了提高洗脫效率，可提前將洗脫液C 置于65℃水浴后再使用。