人視網膜微血管內皮原代細胞

培養信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

人視網膜微血管內皮細胞分離自視網膜組織；視網膜居于眼球壁的內層，是一層透明的薄膜。視網膜由色素上皮層和視網膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網膜脫離。色素上皮層與脈絡膜緊密相連，由色素上皮細胞組成，它們具有支持和營養光感受器細胞、遮光、散熱以及再生和修復等作用。組織學上視網膜分為10層，由外向內分別為：色素上皮層、視錐、視桿細胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內顆粒層、內叢狀層、神經節細胞層、神經纖維層、內界膜。視網膜內層為襯于血管膜內面的一層薄膜，有感光作用；后部鼻側有一視神經乳頭。視網膜上的感覺層是由三個神經元組成。第一神經元是視細胞層，專司感光，它包括錐細胞和桿細胞。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網膜上，而視錐細胞則在中心凹處多。第二層叫雙節細胞，約有10到數百個視細胞通過雙節細胞與一個神經節細胞相聯系，負責聯絡作用。第三層叫節細胞層，專管傳導。視網膜是一層菲薄的但又非常復雜的結構，它貼于眼球的后壁部，傳遞來自視網膜感受器沖動的神經纖維跨越視網膜表面，經由視神經到達出口。視網膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區，其分辨能力。它是組成血管腔面單層扁平上皮樣細胞，它所產生和分泌的生物活性物質對維持血管張力、調節血壓、抗血栓形成等有重要作用，在視網膜血管疾病的發病機制中有重要病理生理學意義。由于從不同的組織和器官獲得的內皮細胞具有不同的特性，在腦和視網膜中，這些內皮細胞具有內屏障的功能，在調節血管生理狀態，釋放血管活性物質以及新生血管的形成中發揮著重要作用，體外分離培養RCEC對研究視網膜血管性疾病發生發展的病理生理機制以及疾病的早期防治具有重要臨床意義。

方法簡介：

公司實驗室分離的人視網膜微血管內皮細胞采用膠原酶-蛋白酶混合消化法結合密度梯度離心法、后通過內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的人視網膜微血管內皮細胞經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

① 組織塊培養法

　　組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　?、?消化培養法

　?、?懸浮細胞培養法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。

　　④器官培養

　　器官培養是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養，器官培養可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響，以及局部環境的生物調節作用。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。(該細胞傳代次數有限約 2 代，建議客戶收到細胞后盡快安排后續實驗)

1、取出細胞瓶，75%酒精消毒后拆下封口膜，放入 37℃，5%CO2 培養箱中靜置 6-8 小時，以穩定細胞狀態。

2、待細胞達到 80%匯合時準備進行傳代培養。

3、細胞傳代：

1)吸出細胞瓶中的培養基，用 PBS 清洗細胞一次。

2)加入 0.125%消化液約 1mL 至培養瓶中，37℃消化 3min 左右；顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入培養液終止消化。

3)用吸管輕輕吹打混勻，按 1:2 或 1:3 等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的培養基至 5mL，放入 37℃ 5% CO2 細胞培養箱中培養。

4)待細胞貼壁后，培養觀察，每隔 2-3 天更換新鮮的培養基。

CLMP Others Mouse 小鼠 ASAM / ACAM 人細胞裂解液   KYSE70細胞，人食管鱗癌 神經膠質瘤細胞,SHG-44細胞 豬腎傳代細胞;IBRS-2  EPOR Others Mouse 小鼠 EPOR 人細胞裂解液   SK-MES-1(人肺鱗癌細胞) 小鼠原代視網膜色素上皮細胞 兔原代鞏膜成纖維細胞

α2-巨球蛋白(α2M)重組蛋白 Recombinant Alpha-2-Macroglobulin (a2M)

IL9 Protein Human 重組人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白

ICOS重組小鼠 ICOS / AILIM / CD278 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CDH18 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CDH18 / Cadherin-18 蛋白

HNRNPR重組人 HNRNPR / HNRNP-R / HNRNP R 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

人載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA 試劑盒

Human tumor specific aigen (TSA) ELISA Kit 人腫瘤特異性抗原(TSA)試劑盒

HumanADisiegrinAndMetalloprotease8,ADAM8ELISAKit 人解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humaninsulinaoaibodies,IAA試劑盒人胰島素自身抗體(IAA)試劑盒規格：96T/48T

組織基質金屬蛋白酶(MMP-9)琥珀酰明膠法比色定量試劑盒20次

HumanLegionellaaibodyIgM，LPAb-IgMELISAKit人軍團菌抗體IgM(LPAb-IgM)試劑盒規格：96T/48T

人整合素連接激酶1(ILK-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人細胞色素P450c21B/21-羥化酶(CYP21B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人細胞色素P450c21A/21-羥化酶(CYP21A)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人末端脫氧核苷酸轉移酶(TdT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人視網膜微血管內皮原代細胞豚鼠內皮素1(ET-1)試劑盒 ，英文名： ET-1 ELISA Kit

Human low density lipoprotein immune complexes (LDL-IC) ELISA Kit 人低密度脂蛋白免疫復合物(LDL-IC)試劑盒

MonkeyIerleukin-2receptor,IL-2RELISAkit白介素2受體(IL-2R)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBigET(HumanBigEndothelin)ELISAKit人大內皮素

細菌尿素酶(UREASE)活性定性染色試劑盒20次

rabbitLeukoieneB4,LT-B4ELISAKit兔子白三烯B4(LTB4)試劑盒規格：96T/48T

ACVR2A重組小鼠 ACVR2A / ActrIIa 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

Beta-Amyloid(1-28 0.5mgBeta-Amyloid(1-28) β淀粉樣肽1-28(多肽蛋白)

NRG1重組人 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標簽) Protein

ITGAX & ITGB2 Protein Human 重組人 ITGAX & ITGB2 Heterodimer 蛋白

FZD4 Protein Rat 重組大鼠 Frizzled-4 / FZD4 蛋白 (Fc 標簽)