人骨髓來源內皮祖原代細胞

培養信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代；不建議多次傳代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

人骨髓來源內皮祖細胞分離自骨髓；骨髓是機體的造血組織，位于身體的許多骨骼內。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用，白細胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細菌、病毒等；某些淋巴細胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質間的網眼中，是一種海綿狀的組織，能產生血細胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細胞增多，相當部分紅骨髓被黃骨髓取代，后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。內皮祖細胞是血管內皮細胞的前體細胞，亦稱為成血管細胞（Angioblast），是一群具有游走特性，能進一步增殖分化的幼稚內皮細胞，缺乏成熟內皮細胞的特征性表型，不能形成管腔樣結構，其功能主要為參與了出生后缺血組織的血管發生和血管損傷后的修復。研究顯示，內皮祖細胞在心腦血管疾病、外周血管疾病、腫瘤血管形成及創傷愈合等方面均發揮重要作用，并為缺血性疾病的研究治療提供了新思路，EPCs生物學特性和治療作用的研究成為這一領域新的熱點。

方法簡介：

公司實驗室分離的人骨髓來源內皮祖細胞采用沖洗骨髓、密度梯度離心、差速貼壁法結合內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的人骨髓來源內皮祖細胞經CD34免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

① 組織塊培養法

　　組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　　② 消化培養法

　?、?懸浮細胞培養法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。

　　④器官培養

　　器官培養是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養，器官培養可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響，以及局部環境的生物調節作用。

Chang liver細胞，CCL13張氏肝細胞正常 人APP-PS1雙基因轉染細胞株(HEK293),APP-PS1細胞 豚鼠皮膚細胞;GP-S3  人腦血管周細胞裂解物HBVCL  小鼠皮層神經膠質細胞(EGFP標記) 小鼠骨骼肌成纖維細胞，NOR-10細胞 小鼠原代胸腺基質細胞 小鼠原代睪丸間質細胞

結合球蛋白(CBG)重組蛋白 Recombinant Corticosteroid Binding Globulin (CBG)

CDK1 Protein Human 重組人 CDC2 Kinase / CDK1 蛋白 (GST 標簽)

FGF1重組人 aFGF / FGF1 蛋白 Protein

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

SMR3B重組人 SMR3B 蛋白 (Fc 標簽) Protein

兔子高遷移率族蛋白1(HMG-1)ELISA 試劑盒

People androstene two ketone (ASD) ELISA Kit 人雄(ASD)試劑盒

Humanai-macrophageaibodyELISAKit 人抗巨噬細胞抗體(ai-macrophageAb)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanepidemicparotitis,EP試劑盒人流行性腮腺(EP)試劑盒規格：96T/48T

組織PKG激酶總活性定量試劑盒(A/B/C)20次

HumanPancreaticPolypeptide,PPELISAKit人胰多肽(PP)試劑盒規格：96T/48T

人粘蛋白21(MUC21)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human MUC21 (Mucin 21) ELISA Kit

人伴侶蛋白10(CPN10)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human CPN10 (Chaperonin 10) ELISA Kit

人趨化素(CHEM)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human CHEM(Chemerin) ELISA Kit

人趨化因子C-C-基元配體1(CCL1)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human CCL1 (Chemokine C-C-Motif Ligand 1) ELISA Kit

人骨髓來源內皮祖原代細胞豚鼠谷轉酶(ALT)試劑盒 ，英文名： ALT ELISA Kit

Human calmodulin (CAM) ELISA Kit 人鈣調素(CAM)試劑盒

rabbitEndostatin,ESELISAKit 兔子內皮抑素(ES)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBACE2ELISAKit大鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2

線蟲繁殖培養試劑盒10次

rabbitCarboxyterminalpropeptideoftypeⅠprocollagen,PⅠCPELISAKit兔子Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)試劑盒規格：96T/48T

LTA4H重組小鼠 Leukotriene A4 Hydrolase / LTA4H 蛋白 Protein

Batroxobin Protein 蛇毒巴曲酶全蛋白 1mgBatroxobin Protein 蛇毒巴曲酶全蛋白

CALML3重組人 CALML3 蛋白 Protein

IL23 Protein Human 重組人 IL-23 (IL23A & IL12B Heterodimer) 蛋白

HGF Protein Rat 重組大鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。(該細胞傳代次數有限約 2 代，建議客戶收到細胞后盡快安排后續實驗)

1、取出細胞瓶，75%酒精消毒后拆下封口膜，放入 37℃，5%CO2 培養箱中靜置 6-8 小時，以穩定細胞狀態。

2、待細胞達到 80%匯合時準備進行傳代培養。

3、細胞傳代：

1)吸出細胞瓶中的培養基，用 PBS 清洗細胞一次。

2)加入 0.125%消化液約 1mL 至培養瓶中，37℃消化 3min 左右；顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入培養液終止消化。

3)用吸管輕輕吹打混勻，按 1:2 或 1:3 等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的培養基至 5mL，放入 37℃ 5% CO2 細胞培養箱中培養。

4)待細胞貼壁后，培養觀察，每隔 2-3 天更換新鮮的培養基。