詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
PP121 | 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
商品介紹:
PP121是多靶點激酶抑制劑,抑制mTOR,DNK-PK,VEGFR2,Src,PDGFR的IC50值分別為10,60,12,14,2nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! CAS號:1092788-83-4 純度:98.89% 分子量:319.36 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環。
西藏木霉Bacillus sp.大鼠胰島(INS)
產氣莢膜梭菌 B型Brevibacillus sp.大鼠C肽(C-Peptide)
釀酒酵母Brevibacillus sp.大鼠C肽(C-Peptide)
叢毛單胞菌Brevibacillus sp.大鼠絨毛膜促性腺激(CG)
傳染性支氣管炎病Bacillus sp.大鼠絨毛膜促性腺激(CG)
銅綠假單胞菌/綠膿桿菌Bacillus sp.大鼠促黃體激(LH)
巨大芽孢桿菌Bacillus sp.大鼠促黃體激(LH)
空泡單胞菌Aneurinibacillus sp.大鼠抗心肌抗體(AMA)
草青霉Bacillus sp.大鼠抗心肌抗體(AMA)
葡萄座腔菌Bacillus sp.大鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)
腸膜明串珠菌Aneurinibacillus sp.大鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)
變紅青霉Aneurinibacillus sp.大鼠磷脂酰肌抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)
多形擬桿菌Aneurinibacillus sp.大鼠磷脂酰肌抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)
土地桿菌Aneurinibacillus sp.大鼠復合前列腺特異性抗原(CPSA)
馬來西亞鏈霉菌Aneurinibacillus sp.大鼠復合前列腺特異性抗原(CPSA)
緊密毛霉Aneurinibacillus sp.大鼠(trypsin)
BTRC2蛋白抗體黃色短波單胞菌大腸埃希氏菌DH5α/pNL4-3
瞬時受體電位離子通道蛋白1抗體M亞家族類產堿假單胞菌大腸埃希氏菌DH5α/pNL4-3 PR(-)
Toll樣受體8抗體黑座克雷伯氏菌淡紫灰鏈霉菌海南變種
動力蛋白輕鏈菠蘿泛菌稻谷枯菌
多靶點激酶抑制劑(PP121)香菇 異補骨脂
嗜果膠黃桿 補骨脂
戊糖乳桿 普通型透析袋(3500)
長枝木霉 木香烴內酯
貝葉多孔 去氫木香內酯
Bacillus atrophaeus 普通型透析袋(3500)
小孢根霉須狀變種 百秋李
枯草芽孢桿 β-胡蘿卜
玫瑰小雙孢 普通型透析袋(3500)
Bacillus 5-羥甲基糠
假密環 龍腦
枯草芽孢桿 普通型透析袋(7000)
地衣芽孢桿 千金子二萜
異常畢赤酵母 再生纖維透析袋(50000)
韓國紅球 續隨二萜