詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
NT157 | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg | 1~3天 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
NT157是一種選擇性的IRS-1/2抑制劑IC50為0.3到0.8μM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! CAS號:1384426-12-3 別名:Tyrphostin NT157 純度:99.19% 分子量:412.26 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環。
茶葉 鈧、釔、鑭 PE標記的小鼠抗人IgGAnti-SHP-1(PTPN6) Antibody核糖核A6(RNASE6)
黑綠木霉Alexa Fluor 647標記的兔抗人IgGAnti-SHP-1(PTPN6) Antibody核糖核A4(RNASE4)
煙曲霉生物標記的兔抗長爪沙鼠IgGAnti-SHP1/PTPN6 Antibody核糖核A3(RNASE3)
耐輻射奇球菌突變株PE-Cy5.5標記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-SI Antibody核糖核A2(RNASE2)
多粘類芽胞桿菌PE-Cy7標記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-SIDT1 Antibody核糖核A13(RNASE13)
群生殼菌PE-Cy3標記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-SIRT1 Antibody核糖核A12(RNASE12)
硝基還原假單胞菌PE-CY5標記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-SIRT1 Antibody核糖核A11(RNASE11)
弗氏鏈霉菌生物標記的兔抗小鼠k鏈Anti-SIRT2 Antibody(PB0174)核糖核A10(RNASE10)
香菇Alexa Fluor 647標記的兔抗猴IgMAnti-SIRT4 Antibody核糖核A(RNASE1)
米根霉PE標記的兔抗小鼠k鏈Anti-SIRT6 Antibody(PB0375)核糖核Ⅲ(RNASEN)
禽腺病PE-CY5標記的兔抗小鼠k鏈Anti-SIRT3 Antibody核外切1(EXO1)
燦爛類芽胞桿菌Alexa Fluor 488標記的兔抗小鼠k鏈Anti-SIX1 Antibody核受體亞家族3C組成員1(NR3C1)
游動放線菌Alexa Fluor 647標記的兔抗小鼠k鏈Anti-SIX3 Antibody核受體相關蛋白1(NURR1)
茄腐鐮刀菌PE-Cy5.5標記的兔抗小鼠k鏈Anti-SIRT7 Antibody(PB0376)核仁(NCL)
詹森青霉FITC標記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-SIX6 Antibody核仁磷蛋白3(NPM3)
豬鏈球菌分型血清參考品 血清型 SS17辣根過氧化物標記的兔抗小鼠k鏈Anti-SKAP1 Antibody核仁磷蛋白2(NPM2)
絲或半胱蛋白水解抑制蛋白1抗體固氮菌屬大鼠主動脈內皮細胞提取物
跨膜硫軟骨蛋白聚糖C抗體克氏梭菌大鼠大隱靜脈內皮細胞提取物
神經腫瘤Nova1抗原抗體簇孢匍柄霉大鼠主動脈平滑肌細胞提取物
突觸細胞粘附分子3抗體短柄帚霉大鼠腸微血管細胞提取物
IRS-1/2抑制劑(NT157)狹孢鐮刀 聚乙烯吡咯烷酮
帚狀云南霉 5,7-二甲氧基黃烷酮
藤黃節桿 黃卡瓦胡椒B
醋化醋桿 胱
孔雀石鏈霉 5,6-二氫甲氧醉椒
Bifidobacterium adolescentis 2,7-二羥基萘
雪白金針菇 赤式-2-(4-烯基-2,6-二甲氧基苯氧基)-1-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-烷-1-
尖孢鐮孢* 脫氧膽酸鈉(豬)
釀酒酵母 醉椒
黃曲霉 原莪述烯
枯草芽孢桿 鹽酸曲唑酮
大腸埃希氏 L-木糖
單胞 異香蘭
芥黃蜜環 熊果酸
中國臺灣相思根瘤 人參皂苷Rk2