詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
MI-773 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
MI-773是一種MDM2-p53相互作用抑制劑,高親和力結合到MDM2,Ki為0.88nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! CAS號:1303607-07-9 純度:98.0% 分子量:562.5 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環。
鼠傷寒沙門氏菌小鼠主要組織相容性復合體Ⅲ類Anti-NHLH1 Antibody人同型半胱(Hcy)
釀酒酵母小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白Anti-NKTR Antibody人同型半胱(Hcy)
矮棒曲霉人白介27Anti-NID1 Antibody人游離脂肪(FFA)
發酵畢赤酵母大鼠抗甲狀腺過氧化物抗體Anti-NKX2-1 Antibody人游離脂肪(FFA)
釀酒酵母人白介28Anti-NIFK Antibody人骨粘連蛋白(ON)
棘孢曲霉人白介29Anti-NKX2-6 Antibody人骨粘連蛋白(ON)
墨西哥畢赤酵母大鼠凋亡誘導因子Anti-NKX2-4 Antibody人葉(FA)
枯草芽孢桿菌人白介23Anti-NKX2-6 Antibody人葉(FA)
暗黑鏈霉菌小鼠CD30分子Anti-NKx2.2 Antibody 人內(ET)
雙孢蘑菇小鼠主要組織相容性復合體Ⅱ類Anti-NKX3-1 Antibody人內(ET)
光滑青霉人巨噬移動抑制因子Anti-NKX2-8 Antibody人過氧化物體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)
居巖牙殖球菌大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體Anti-NKX6-3 Antibody人過氧化物體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)
環柄菇人組織因子途徑抑制物Anti-NLRX1 Antibody人環孢A(CsA)
擬青霉小鼠可溶性血管內皮蛋白C受體Anti-NKX6-3 Antibody人環孢A(CsA)
彩色豆馬勃大鼠堿性磷Anti-NLE1 Antibody人神經膠質纖維性蛋白(GFAP)
釀酒酵母人干擾誘導蛋白10Anti-NMBR Antibody人神經膠質纖維性蛋白(GFAP)
軟骨肉瘤相關蛋白2抗體火木層孔菌人肝癌細胞(干細胞庫保藏)
腎結合蛋白抗體淺黃褐栓菌人間皮瘤細胞
環指蛋白211抗體#放射形土壤桿菌人髓母細胞瘤細胞Daoy(干細胞庫保藏)
RET指蛋白樣2/3抗體#需土節桿菌人小細胞肺癌
MDM2-p53相互作用抑制劑(MI-773)鯉鏈霉 對羥基丁酯
日本根霉 月桂酸甲酯
枯草芽孢桿 對羥基甲酯
嗜酸乳桿 單硬脂酸甘油酯
米根霉 萘AS-BI磷酸二鈉
卵形巴貝斯蟲(文縣株) 萘AS-TR磷酸鹽
毛木耳 萘AS-TR乙酸酯
食苯芽胞桿 4-N,N-二甲基氨基偶氮苯-4`-異硫酸酯
蘇云金芽孢桿 焦碳酸二乙酯
纖細白僵 二十七烷
粘質沙雷氏 三苯烷
猴頭 二安替比林
耐鹽咸海鮮球 1,1,3,3-四乙氧基烷
塔賓曲霉 2,2-二(4-羥基苯)烷
釀酒酵母 角鯊烷