詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
PAC-1 | 1mL(10mM)|10mg|50mg | 1~3天 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
PAC-1是一種procaspase-3激活劑,誘導癌細胞凋亡,EC50為2.08μM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! CAS號:315183-21-2 別名:Procaspase activating compound 1 純度:95.98% 分子量:392.49 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環。
大腸桿菌Cy7標記的小鼠抗兔IgMAnti-TAF12 Antibody甘轉運蛋白2(GLYT2)
產黃青霉PE標記的小鼠抗兔IgMAnti-TAGLN Antibody甘轉運蛋白1(GLYT1)
佛雷德里克斯堡假單胞菌APC標記的小鼠抗兔IgMAnti-Talin 1/TLN1 Antibody甘脫氫(GLDC)
鞘盒菌屬Alexa Fluor 350標記的小鼠抗兔IgMAnti-TAL1 Antibody甘脒基轉移(GATM)
黑木耳Cy3標記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TANK Antibody蓋膜蛋白β(TECTβ)
Pseudomonas extremaustralisCy5標記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TAP2 Antibody蓋膜蛋白α(TECTα)
淺白隱球酵母Cy5.5標記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TAP1 Antibody(PB0868)鈣周期結合蛋白(CACYBP)
釀酒酵母Cy7標記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TAT Antibody鈣粘蛋白EGFLAG七經G-型受體2(CELSR2)
彩色豆馬勃PE標記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TAZ Antibody鈣營養蛋白1(CALN1)
乙型溶血性鏈球菌PE-Cy3標記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TBC1D4 Antibody鈣網蛋白3(CALR3)
蘇云金芽孢桿菌PE-CY5標記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TAZ Antibody鈣同線蛋白3(CLSTN3)
溶桿菌APC標記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TBK1 Antibody鈣同線蛋白2(CLSTN2)
赭綠青霉Alexa Fluor 350標記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TBP Antibody鈣同線蛋白1(CLSTN1)
花臉蘑Alexa Fluor 488標記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TBP Antibody鈣調(RGN)
釀酒酵母Alexa Fluor 555標記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TBP-1/PSMC3 Antibody鈣調寧蛋白2(CNN2)
哈茨木霉Alexa Fluor 647標記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TBX5 Antibody鈣調寧蛋白1(CNN1)
細胞質磷1抗體考克氏菌屬人小腸粘膜組織提取物
磷烯羧激抗體鞘菌屬人食管組織提取物
多聚合α抗體赤霉菌屬人結腸組織提取物
多聚合g抗體輪層炭菌屬(斜面)人小腸組織提取物
procaspase-3激活劑(PAC-1)巨大芽胞桿 訶子鞣質
黃曲霉 訶子寧
棕黑腐質霉 訶子次酸,訶子裂酸
亞黃絲蓋傘 靈芝酸C6甲酯
炭疽芽胞桿 靈芝酸H甲酯
青霉屬 靈芝酸C6
檸檬色游動球 甘草黃酮C
聚生殼 (+)-表松脂酚
病研所芽孢桿 (-)-松脂
美麗鹽單胞 黃芩苷甲酯
新瀉節桿 千層紙A-7-0-β-D-葡萄糖酸苷甲酯
黑曲霉 (E)-3'-羥基-4'-甲氧基肉桂酸甲酯
毛栓孔 去芹-桔梗皂苷D3
Pseudomonas extremaustralis 酚-3-O-(6''-O-順-香豆酰基)葡萄糖苷
枯草芽胞桿 疏展香茶菜寧E