詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
SKI II | 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg|200mg | 1~3天 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
SKI II是一種合成的鞘氨醇激酶(SK)抑制劑,抑制SK1和SK2,IC50值分別為78μM和45μM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! CAS號:312636-16-1 純度:98.69% 分子量:302.78 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環。
產短桿菌人凋亡相關因子配體Anti-OR5AU1 Antibody人α烯化(αENOL)
根瘤菌大鼠原激活肽Anti-OR5AU1 Antibody人α烯化(αENOL)
白布勒擔孢酵母大鼠補體因子HAnti-OR5B12 Antibody人膠原II(Collagenase II)
產氣腸桿菌人凋亡相關因子Anti-OR5B3 Antibody人膠原II(Collagenase II)
放射桿狀根瘤菌小鼠CD8分子Anti-OR5F1 Antibody人膠原I(Collagenase I)
果生鏈核盤菌人E選擇Anti-OR5H1 Antibody人膠原I(Collagenase I)
解淀粉芽孢桿菌植物亞種大鼠膀胱腫瘤抗原Anti-OR5D13 Antibody人磷化蛋白激C(P-PKC)
大腸桿菌小鼠CD25分子Anti-OR5D16 Antibody人磷化蛋白激C(P-PKC)
豬鏈球菌人嗜粒趨化蛋白Anti-OR5H15 Antibody人磷化外信號調節激(pERK)
假單胞菌小鼠CD20分子Anti-OR5H15 Antibody人磷化外信號調節激(pERK)
橡膠疫霉大鼠血小板衍生生長因子BBAnti-OR5H6 Antibody人磷化外信號調節激(pERK)
地衣芽孢桿菌小鼠CD14分子Anti-OR5I1 Antibody人磷化外信號調節激(pERK)
克魯維尼爾巴克酵母大鼠胃蛋白Anti-OR5K1 Antibody人乙酰酯(AChE)
洲黑蛋巢人鼠嗜粒趨化因子Anti-OR5M1 Antibody人乙酰酯(AChE)
南類芽孢桿菌小鼠神經生長因子Anti-OR5L1 Antibody人葡萄糖氧化(GOD)
大腸埃希氏桿菌人內分泌腺來源的血管內皮生長因子Anti-OR5M1 Antibody人葡萄糖氧化(GOD)
乳腺癌和卵巢癌易感基因RAD51C抗體豬屎豆根瘤菌人腎上腺皮質小細胞癌細胞
染色體濃縮調控蛋白1抗體#姬菇人甲狀腺癌細胞ACT-1(干細胞庫保藏)
受體結合絲蘇激2抗體黃硬皮馬勃人低分化肺腺癌細胞
孤兒核受體抗體#桑葉刺盤孢人耐VP16絨癌細胞株
鞘氨醇激酶(SK)抑制劑(SKI II)釀酒酵母 甲氧呋豆
塔賓曲霉 櫻黃
圈卷產色鏈霉淺色變種 Isoelemicin
*櫻桃鏈格孢 Ethyl orsellinate
三聚對照液 2,4-二羥基-3,6-酸甲酯,橡苔
釀酒酵母 beta-香樹精樹精
豬布魯氏 生物Ⅱ型 大豆甾B
白布勒擔孢酵母 Sitostenone
新疆鹽地桿 松脂,松脂,松脂
深褐毛殼 Methyl sinapate
酮丁梭 3,4-二甲氧基-5-羥基甲酯
蘇云金芽胞桿 秦艽甲
東方伊薩酵母 過氧麥角甾
黑綠青霉 阿福豆苷
冷卻劑四合球 3-苯基-2-烯-1-