商品介紹:
PS-1145是一種特異性的IkappaB激酶(IKK)抑制劑,IC50為88nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):431898-65-6 純度:99.93% 分子量:322.75 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
枯草芽孢桿菌Pseudomonas sp.兔乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)
羊毛鏈霉菌Curtobacterium sp.兔心肌特異性肌鈣蛋白T(c)
蘋(píng)果鏈格孢Vibrio sp.兔心肌特異性肌鈣蛋白T(c)
硬皮地星Paenibacillus sp.兔溶菌(LZM)
Trichococcus(可定)Vibrio sp.兔溶菌(LZM)
短小芽孢桿菌Listeria sp.兔子催乳(PRL)
菊異莖點(diǎn)霉Vibrio sp.兔子催乳(PRL)
草木棲劍菌Vibrio sp.兔子促黃體激(LH)
海唯鹽菌Vibrio sp.兔子促黃體激(LH)
新城疫病Rothia sp.兔抗腦組織抗體(ABAb)
孢小克銀漢霉輪生變種Rothia sp.兔抗腦組織抗體(ABAb)
黃斑紅菇Staphylococcus sp.兔p53(p53)
釀酒酵母Staphylococcus sp.兔p53(p53)
橙色微桿菌Staphylococcus sp.兔Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)
弗氏檸檬桿菌Staphylococcus sp.兔Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)
枯草芽孢桿菌Budvicia aquatica兔阿霉(ADR)
金屬蛋白組織抑制因子-4抗體解阿伯半乳聚糖微桿菌茄腐皮鐮孢
線粒體DNA拓普西異構(gòu)Ⅰ抗體人參土地類(lèi)芽孢桿菌青霉菌屬菌種
睪丸激孤兒受體相關(guān)蛋白抗體人參土噬幾丁質(zhì)菌群山擬諾氏菌
生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因3抗體神戶類(lèi)芽孢桿菌山丘鏈霉菌
IkappaB激酶(IKK)抑制劑(PS-1145)假絲酵母屬 糖化
脆泊氏孔 菠蘿蛋白
黑曲霉 高溫α-淀粉
黃曲霉 β-葡萄糖苷
釀酒酵母 半纖維
擬郎比可假絲酵母 α-淀粉(枯草桿)
水生布戴約維采 頭孢
釀酒酵母 乙酰肉堿轉(zhuǎn)移
紫色鏈霉 5'-磷酸二酯
麥?zhǔn)辖惶鎲伟?/span> 過(guò)氧化氫
腸沙門(mén)氏腸亞種 乙酰酯(電鰻魚(yú))
短小芽孢桿 肝III
微小桿 肝II
多主葡萄殼 肝Ⅰ
蘇云金芽孢桿 肝Ⅰ