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轉化細胞傳代的重要事項

閱讀:464          發布時間:2018-2-5

如果轉化細胞是屬于那種很容易消化的細胞,像RAW264.7,僅僅第二步就搞定了。就沒必要第三步第四步了。這個是需要你在實驗中能夠自己用心去體會的。建議你接受一個新細胞時把各步消化的細胞分別培養起來做比較,去摸索好細胞對胰酶的要求。便于你后續實驗的開展。

將細胞消化分成這幾步,除了是為了避免胰酶對細胞的損傷之外,還有一個更重要的作用就是,可以zui大程度地把細胞吹打成單個單個的狀態,不成片不連體。

因為細胞生長的時候肯定是要相互,大部分的細胞都是要成片生長的,尤其是對于貼壁細胞,單個細胞貼壁之后長著長著就長到一片去了。但是如果是成片的細胞抱團的話,傳代后細胞是不能貼壁的,這樣抱團的細胞就會死亡。所以,消化傳代的時候一定要將細胞消化成單個單個的獨立狀態,這個啊是非??季磕愕墓Ψ虻模?/p>

細胞一旦脫落入懸液里你很難再將他吹打成單個,因為他沒有受力點了。很難找到受力點讓你對他吹打的力分散開細胞。所以必須要在細胞未脫落之前將其吹打開,受力點就是細胞貼壁的地方。這樣你就必須要嚴格控制好消化的程度啊,這和大師做飯掌握好火候是一樣的道理啊。既要消化到容易吹打下來,又不能太過,一吹就整片脫落,要單個單個地往下掉。所以我才要分批分次地加胰酶消化就是為了保證不同生長狀態貼壁程度的細胞能夠都維持在好的受力點分散開。這個是很重要的一點。尤其是對于某些細胞這一點就是他死的致命點。像Caco-2細胞就是如此。

另外關于傳代很重要一點就是一定不能等到轉化細胞長滿的時候才去消化傳代。要在細胞長到70%左右的時候就要傳代了,一旦發現細胞生長中已經有疊層生長的時候就要立即進行消化傳代。不能再拖了。
HPLC≥98%    (R型)原人參三醇    20mg/支    Protopanaxtriol    
HPLC≥98%    雪膽素甲    20mg/支    Curcurbitacin IIa    
HPLC≥98%    雪膽素乙    20mg/支    Curcurbitacin Iib    
HPLC≥98%    蔓荊子黃素    20mg/支    vitexicarpin    
HPLC≥98%    龍血素B    20mg/支    LOUREIRIN B    
HPLC≥98%    劍葉龍血素C    20mg/支    Cochinchinenin C    
HPLC≥98%    辛夷脂素    20mg/支    demethoxyaschantin    
HPLC≥98%    烏藥醚內脂    20mg/支    Linderane    
HPLC≥98%    漆黃素(非瑟酮/紫鉚素)    20mg/支    Fisetin  
轉化細胞 

 

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