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技術(shù)文章

冷凍保存細(xì)胞的解凍與復(fù)蘇要點(diǎn)

閱讀:1204          發(fā)布時(shí)間:2017-4-20

腫瘤細(xì)胞冷凍保存細(xì)胞的解凍與復(fù)蘇要點(diǎn):慢凍快融
 
(1)快速解凍。凍存細(xì)胞從液氮中取出后,應(yīng)立即放入 37℃水浴中,輕輕搖動(dòng)冷凍管,使其在 1 分鐘內(nèi)全部融化(不要超過 3 分鐘)。
 
(2)解凍操作過程動(dòng)作要輕。由于冷凍保存過的細(xì)胞變得非常脆弱,不僅解凍速度要快,而且動(dòng)作要輕。一般情況下,解凍后的細(xì)胞可直接接種到含*生長(zhǎng)培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中直接進(jìn)行培養(yǎng)(1ml 凍存細(xì)胞液加入到 25-30ml 新鮮*培養(yǎng)液中),24 小時(shí)后再用新鮮*培養(yǎng)替換舊培養(yǎng)液,以去除 DMSO。如果,細(xì)胞對(duì)冷凍保護(hù)劑特別敏感,那么,解凍后的細(xì)胞應(yīng)先通過離心去除冷凍保護(hù)劑,然后再腫瘤細(xì)胞接種到含*生長(zhǎng)培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。
 
特別注意:
 
(1)解凍時(shí)務(wù)必注意安全,預(yù)防冷凍管爆裂。要帶手套,用鑷子將細(xì)胞冷凍管從液氮中取出,放入 37℃水浴中。切不可直接用手,以免凍傷。
 
(2)冷凍管在水浴中解凍時(shí),要將凍存管蓋子擰緊,確定擰緊后再投入水浴鍋中腫瘤細(xì)胞,注意液面不可超過凍存管蓋面,否則,易發(fā)生污染。

 

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