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RNase R (Ribonuclease R)是由碧云天自主研發(fā)的PerfectProtein™技術(shù)平臺(tái)表達(dá)、純化獲得的一種來(lái)源于大腸桿菌的Mg²⁺依賴(lài)的3'→5'核糖核酸外切酶。RNase R能消化線(xiàn)性RNA (Linear RNA)，但不能消化環(huán)狀RNA (Circular RNA, circRNA)、套索RNA (Lariat RNA)、3’突出末端少于7個(gè)核苷酸的雙鏈RNA以及具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的tRNA、5S RNA等[1, 2]。

RNase R常用于消化除去線(xiàn)性RNA，以獲得環(huán)狀RNA (也稱(chēng)環(huán)形RNA)、內(nèi)含子套索(Intron lariat)等非線(xiàn)性RNA。RNase R為環(huán)狀RNA的研究提供了極大的便利，也可以給研究RNA剪接(RNA splicing)帶來(lái)很大的便利。套索RNA是在pre-mRNA的剪接內(nèi)含子過(guò)程中產(chǎn)生的，經(jīng)RNase R消化，可以從總RNA中被分離出來(lái)而用于后續(xù)研究。

碧云天生產(chǎn)的RNase R不能消化環(huán)狀RNA但可以消化線(xiàn)性RNA的效果請(qǐng)參考圖1。

圖1. 碧云天生產(chǎn)的R7092 RNase R可以消化線(xiàn)性RNA但不會(huì)消化環(huán)狀RNA的效果圖。在20µl反應(yīng)體系中含20mM Tris-HCl (pH8.0), 0.1mM MgCl₂和100mM KCl，以長(zhǎng)度為22nt的等摩爾數(shù)(4pmol，約0.03μg)的線(xiàn)性或環(huán)狀RNA作為底物，并加入圖中ZHI定量的本產(chǎn)品或國(guó)外L公司(Competitor)的RNase R。37℃孵育30min，70℃孵育10min終止反應(yīng)。隨后加入4μl 6X DNA Loading Buffer (D0071)，95℃變性5min，然后取出15μl進(jìn)行7M Urea 15%聚丙烯酰胺凝膠電泳(室溫條件下用0.5X TBE作為電泳液，180V電泳90min，NA-Red溶液(1000:1) (D0128/D0130)室溫染色10min，拍照觀察結(jié)果)。如圖所示，本產(chǎn)品與國(guó)外L公司的產(chǎn)品相比，具有類(lèi)似的消化效果。圖中效果僅供參考，在不同實(shí)驗(yàn)條件下獲得的效果可能會(huì)有所不同，圖中效果僅供參考。

用途：環(huán)狀RNA研究，環(huán)狀RNA中去除線(xiàn)性RNA，可變剪接研究，內(nèi)含子套索序列的分析和鑒定等。

來(lái)源：由大腸桿菌表達(dá)，表達(dá)基因?yàn)?span style="margin: 0px; padding: 0px; border: 0px; text-align: left; font-style: italic; background-color: transparent !important;">E.coli RNase R基因。

活性定義：One unit converts 1μg of poly-r(A) into acid-soluble nucleotides in 10 minutes at 37℃ in 20mM Tris-HCl (pH8.0), 100mM KCl and 0.1mM MgCl₂。

純度：不含DNase，不含其它RNA內(nèi)切酶和外切酶活性。

酶儲(chǔ)存溶液：50mM Tris-HCl (pH7.5 @25℃), 200mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100。

10XReaction Buffer：200mM Tris-HCl (pH8.0 @25℃), 1M KCl, 1mM MgCl₂.

失活或抑制：70℃加熱10分鐘可使RNase R失活。

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