化工儀器網
詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| LM/TK (LMTK-) (小鼠胸腺激酶缺陷細胞) | 1×10?cells/T25培養瓶 | GOY-01X0141 |
商品介紹：
名稱 LM/TK (LMTK-) (小鼠胸腺激酶缺陷細胞) 別稱L-M[TK-]; LM TK negative; L-M (TK-); L M (TK-); LM(TK-); LM(tk-); LM-TK-; LMTK-; L cells (TK-); L(TK-); L(tk-) 種屬小鼠 年齡（性別）100天 組織來源皮下結締組織；乳暈和脂肪 生長特性貼壁細胞 細胞形態成纖維細胞樣 生物安全等級1 生長培養基DMEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, in nude mice (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells). 抗原表達情況H-2k |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
大鼠復制蛋白A 70kDaDNA結合亞基(RPA1)免疫試劑盒現貨供應
犬細小病毒(PV)抗體(IgG)免疫試劑盒現貨供應
小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)免疫試劑盒現貨供應
牛1-磷脂酰肌醇-4,5 - 二二酯ζ1(PLCZ1)免疫試劑盒進口、分裝
OJ抗體/抗異亮氨酰tRNA合成抗體(OJ/IleRS)免疫試劑盒進口、組裝
丙酮酸脫氫E1(PDH E1)免疫試劑盒進口、分裝
牛甘膽酸(CG)免疫試劑盒現貨供應
鈣調素特異抗體(CAM-ab)免疫試劑盒進口、組裝
內皮細胞特異分子-1(ESM-1)免疫試劑盒*直銷
絲肽抑制劑,Kazal 1型(SPINK1)免疫試劑盒進口、組裝
LM/TK (LMTK-) (小鼠胸腺激酶缺陷細胞)胰蛋白胨大豆瓊脂顆粒 TSA Agar 250g
100U Pfu DNA聚合 Pfu DNA Polymerase -20℃保存
胰月示-亞硫酸鹽-環瓊脂基礎（TSC） Tryptose Sulfite Cycloserine Agar Base 250g
20次 酵母電轉感受態細胞制備試劑盒 Yeast Electro Competent Cell
Preparation Kit 常溫
2 ug pNFAT-TA-Luc pNFAT-TA-Luc 低溫運輸，-20℃保存
MT培養基 MT，Medium 250g
1瓶 TE671 subline No.2細胞株 TE671 subline No.2 低溫運輸和保存
化工儀器網