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1,用特殊的微孔板作為測定板,大鼠ELISA試劑盒用親和素包被微孔板,然后用生物素標(biāo)記探針的3端,再通過該生物素和包被在微孔板上的親和素發(fā)生連接,將探針固定在微孔板上,形成一個固相捕獲系統(tǒng).注意:探針5端和待檢靶序列5端的一段要互補(bǔ).
2,在擴(kuò)增時,引物用抗原(生物素,地的高辛或熒光素酶等)標(biāo)記,這樣擴(kuò)增產(chǎn)物中就會滲入抗原.
3,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與微孔板上的探針雜交,從而捕獲被測靶序列,由于擴(kuò)增產(chǎn)物中已經(jīng)滲入抗原,在微孔中加入HRP標(biāo)記抗體后,酶標(biāo)抗體就與靶序列的抗原免疫結(jié)合,zui后加入酶底物進(jìn)行酶促顯色,大鼠ELISA試劑盒通過光密度測定實(shí)現(xiàn)定量.
    PCR-ELISA比PCR本身在病毒分型,基因多態(tài)性分析與克隆鑒定等方面有其*的優(yōu)勢.另外,不應(yīng)用同位素標(biāo)記,因而避免了放射性帶來的危害,而且整個實(shí)驗(yàn)周期僅需6h左右,較Southern blot雜交大為縮短實(shí)驗(yàn)時間,操作簡便,可用于大量標(biāo)本的檢測.盡管與熒光素染色凝膠電泳相比較,PCR-ELISA檢測結(jié)果的特異性,靈敏性和準(zhǔn)確性有顯著的提高,但是ELISA試劑盒基本上是一個開放性的反應(yīng)系統(tǒng),特別是在洗滌elisa酶聯(lián)免疫試劑盒價格反應(yīng)板時,很容易造成污染,從而引起假陽性.因此,在PCR-ELISA整個實(shí)驗(yàn)過程中,必須進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作.同是,PCR-ELISA對PCR產(chǎn)物和探針的雜交條件(PCR產(chǎn)物的稀釋度,雜交溫度和時間)要求嚴(yán)格.
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