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BIU-87人膀胱癌細胞實驗操作步驟

細胞傳代與擴增

當細胞密度達到80%-90%時，需進行傳代操作。棄去舊培養基，用預冷的PBS輕柔洗滌2次以去除殘留血清。加入1 mL 0.25%胰蛋白酶（含EDTA），37℃孵育1-2分鐘，顯微鏡下觀察細胞回縮變圓后，立即加入含血清的培養基終止消化。吹打制成單細胞懸液，按1:3至1:5比例分裝至新培養瓶，補充適量培養基后置于孵箱繼續培養。注意記錄傳代次數，避免細胞狀態因過度傳代而下降。

細胞凍存與復蘇

凍存：取對數生長期細胞，消化離心后棄上清，用預冷的凍存液（90%血清+10%DMSO）重懸至1×10?/mL，分裝至凍存管，標記細胞名稱、代次及日期。程序性降溫：4℃ 30分鐘→-20℃ 2小時→-80℃過夜，最后轉入液氮長期保存。

復蘇：從液氮中快速取出凍存管，37℃水浴震蕩至融化，酒精消毒后轉移至15 mL離心管，緩慢加入5 mL預溫培養基，離心去除DMSO。沉淀用新鮮培養基重懸，接種至培養瓶，24小時后更換培養基以去除死細胞碎片。

實驗質量控制

- 無菌操作：超凈臺需提前紫外滅菌30分鐘，操作中避免手部跨越開放容器。

- 交叉污染排查：定期通過STR鑒定確認細胞株身份，顯微鏡下觀察形態是否均一。

- 數據記錄：詳細記錄接種密度、處理時間及異常現象（如顆粒增多、空泡化等）。

?常見問題與解決方案

- 生長緩慢：檢查血清批次活性或調整接種密度。

- 污染處理：若出現真菌污染（菌絲狀漂浮物），立即廢棄培養物并用0.1%過氧乙酸清潔孵箱。