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檢測胰高血糖 素 GLP-1 受體的 Kd 值

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Cisbio 的 Tag-lite HTRF 平臺能 夠 有效 地 用 HTRF 熒 光
團標記目標位點上感興趣的蛋白。細胞表面受體可以插
入 SNAP-tag 質粒中,然后用這種結構轉染細胞并表達
標記的受體。通過添加 snap -lumi4-Tb 底物,用鋱 (Tb)
穴狀化合物標記受體。為了進行結合試驗,受體的配體
用 HTRF 受體熒光團標記,例如 d2。當 d2 配體與鋱標
記的受體結合時,可以使用具備 HTRF 功能的微孔板讀
板機檢測受體到配體的時間分辨熒光共振能量轉移 (TRFRET) ( 圖 1)。
Cisbio 提供了多種標簽和興趣蛋白標記編碼的質粒,以
及已經用這些結構物轉染的冷凍細胞。該結構體能夠表
達標記蛋白,如受體,可以用鋱標記,同時其受體配體
( 激動劑或拮抗劑 ) 用受體熒光團標記。Tag-lite 平臺適
用于廣泛的應用,如受體二聚化、配體結合分析和第二信
使評估。結合動力學可以研究藥物 - 蛋白質復合物的結
合和解離速率,是優化候選藥物體內療效的必要步驟
1。

 

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