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人間充質干細胞誘導成軟骨分化試劑盒是愛必信生物研發的一款用于人類間充質干細胞分化成軟骨產品，可用于骨髓、臍帶、脂肪等組織來源的間充質干細胞的誘導成軟骨分化。具有誘導分化程序簡單便捷、誘導成軟骨細胞效率高等特點。

人間充質干細胞誘導分化成軟骨細胞

1. 實驗準備
人間充質干細胞成軟骨分化培養基的配制：
1.1 在2-8℃解凍人間充質干細胞成軟骨分化添加劑，輕晃搖勻；
1.2 將添加劑加入到人間充質干細胞成軟骨分化基礎培養基中（添加劑10mL與90mL基礎培養基*混合）混勻，即為人類間充質干細胞成軟骨分化培養基。人間充質干細胞成軟骨分化培養基可在2-8℃穩定儲存2-3周。
注意：人間充質干細胞成軟骨分化添加劑只能在2-8℃解凍，待添加劑加入到培養基以后，請用培養基潤洗添加劑試管1-2次，因添加劑量較少可防止添加劑粘附在試管壁上造成損失。
2. 實驗操作
2.1誘導成軟骨球
2.1.1 誘導成軟骨分化實驗之前，用Xeno-Free細胞消化液消化后計數；
2.1.2 分配0.5 mL細胞懸液（2-3×105個細胞）到15mL或50mL離心管中，300×g，離心5min；
2.1.3 吸掉上清，用2-5mL人間充質干細胞成軟骨分化培養基重懸沉淀。
2.1.4 離心后擰松離心管蓋便于氣體交換，置于37℃，5%CO2培養箱中培養，第2天，細胞團應在離心管底部呈球形的團狀；
注意：離心后不需要吸掉上清液，且不要隨意晃動離心管。
2.1.5 自接種時間開始計算，每天更換人間充質干細胞成軟骨分化培養基；
注意：每次換液時，輕輕的搖動離心管或輕彈離心管底部確保細胞球沒有粘附到管壁上。第4-5天即會看到非常明顯軟骨球。
2.1.6 15-21天，軟骨球停止生長，收獲軟骨球：吸掉人間充質干細胞成軟骨分化培養基，用PBS洗1次。
2.2 成軟骨檢測染液染色
2.2.1 清洗：軟骨球用PBS清洗2次；
2.2.2 固定：加2mL細胞固定液，固定30min，水洗2次；
2.2.3 染色：成軟骨檢測染液（Applied Cell:AC-1001023）染色5min；
2.2.4 洗滌：dH2O洗去多余的染料，軟骨球呈深藍色。
2.3切片染色：
2.3.1、復水：將誘導分化的軟骨球切片浸泡在* (vol/vol) 乙醇中2 × 5 min， 95% (vol/vol) 乙醇中 1 × 2min，70% (vol/vol)乙醇中1 × 2 min；
2.3.2、用流動的水沖洗30s；
2.3.3、成軟骨染料染色5min；
2.3.4、用dH2O洗去多余的染料；
2.3.5、脫水：浸泡在95% (vol/vol) 乙醇中2×5min，在* (vol/vol) 乙醇中2×5min;
2.3.6、用二甲苯清洗3 × 2 min；
2.3.7、用中性樹膠封片，用顯微鏡觀察并拍照。

基礎培養基2-8℃，添加劑-20℃--80℃保存；混合后2-8℃保存，3周內使用完畢

人間充質干細胞誘導成軟骨分化添加劑只能在2-8℃解凍，可按實際用量對添加劑進行分裝，分裝后立即使用或儲存于-20℃至-80℃保存。

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