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正確處理樣本是保證ELISA檢測正確性和準確性重要步驟

閱讀:1110      發布時間:2022-11-27
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   通常我們用ELISA來檢測的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細胞培養上清或組織勻漿液等,不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的第一步。
  1.血清
  血清是常用于ELISA檢測的一類樣本,處理也比較簡單。用無熱原、無內毒素的試管或離心管采集血液標本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃一個晚上,使血清析出。(最好將試管或離心管傾斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的析出)。4℃1000×g離心20分鐘,仔細收集上清。建議將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
  采血過程中應避免溶血,因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質,在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色,而導致檢測的不準確性。同時也應避免細菌污染,因為菌體內可能含有內源性的HRP從而導致檢測的假陽性。
  2.血漿
  ELISA實驗用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本,標本采集后30min內4℃1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等,檢測時還應仔細閱讀試劑盒說明書,檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。
  3.細胞培養上清
  取細胞培養上清到離心管,1000×g離心20min,除去細胞碎片及雜質,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
  4.細胞裂解液
  (1)吸去培養板內的培養基,用胰酶消化細胞,加適量培養基將細胞從培養板上吹下來。懸浮細胞可省略。
  (2)收集細胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養基,用預冷的PBS潤洗3次。
  (3)加入適量的預冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。
  (4)將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復凍融幾次,使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎,以達到裂解的目的。
  (5)4℃10000×g離心10min,除去細胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。

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