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支原體常規PCR檢測試劑盒（不含Taq酶）
10種常見支原體檢測限
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支原體常規PCR檢測試劑盒（經典法）（不含Taq酶）操作步驟
第1步：樣本處理
a. 細胞培養上清
b. 生物藥或需遵循藥典的樣本
說明：①樣品基質可能會影響檢測的靈敏度。收集和篩選更高的樣品量可提高測定靈敏度。
②細胞培養物樣本含豐富的DNA酶，在低溫下也能降解支原DNA，影響檢測靈敏度。
建議：樣本做DNA抽提處理，實現高靈敏度。
推薦：德國MB公司生產的支原體DNA提取試劑盒，Venor® Gem Sample Preparation Kit。該DNA抽提試 劑盒已經過廣泛驗證。
第2步：試劑制備
第3步：PCR體系建立
a. 細胞培養上清
b. 生物藥或需遵循藥典的樣本
第4步：啟動PCR反應
第5步：電泳結果分析
191bp為內控對照條帶，表明PCR反應正常。
當樣本存在支原體污染時，由于內控對照與支原體DNA存在競爭，內控對照條帶變弱（例如支原體DNA＞103拷貝）。
陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內控對照條帶會*消失。
可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結果。
如果待測樣本對PCR產生抑制，則內控對照條帶變弱（和陰性對照相比），此時應先進行DNA抽提（推薦使用：Venor® Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒，然后再檢測。
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