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巖藻糖基轉移酶3(FUT3)重組蛋白

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產品型號

品       牌其他品牌

廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2023-03-21 19:00:37瀏覽次數:278次

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供貨周期 現貨 應用領域 化工,生物產業
主要用途 僅供科研實驗 英文名稱 Recombinant Fucosyltransferase 3 (FUT3)
種屬 Homo sapiens (Human,人) 規格 10μg50μg200μg1mg5mg
品牌 研生
巖藻糖基轉移酶3(FUT3)重組蛋白公司正在出售的產品:病毒H5亞型(AIV-H5)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法)百日咳桿菌和副百日咳桿菌PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)嗜水氣單胞菌PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)貓種特異性基因PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)病毒H5亞型PCR檢測試劑盒 (熒光PCR法)同牛皰疹病毒3型牛巨細胞病毒PCR檢測試劑盒牛腸杯狀病毒PCR檢測試劑盒價格牛腸道病毒PC

公司產品僅供科研實驗產品屬性:

產品名稱:巖藻糖基轉移酶3(FUT3)重組蛋白   

物種:Homo sapiens (Human,人)

英文名稱:Recombinant Fucosyltransferase 3 (FUT3)

CD174; FUT3; FT3B; LE; Les; FucT-III; Lewis FT; Galactoside 3(4)-L-Fucosyltransferase, Lewis Blood Group; Blood group Lewis alpha-4-fucosyltransferase

酶與激酶

代謝通路

腫瘤免疫

感染免疫

物種:Homo sapiens (Human,人)

來源:原核表達

宿主E.coli

內毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細胞定位::細胞膜, 高爾基體

預測分子量:30.4kDa

實際分子量:30kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標簽:Phe30~Lys259 with N-terminal His Tag

緩沖液成份:20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)

性狀:凍干粉

純度:> 80%

等電點:9.1

應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規格10μg50μg200μg1mg5mg

特點:

標記:標記反應簡單、溫和且很少抑制抗體活性,將與抗體共價結合是一種非常簡便、直接的標記方法。

酶標記:酶標記抗體是將酶與特異性抗體經適當方法連接而成,其應用范圍非常廣泛,結果即時可見、敏感性高。

熒光標記:熒光基團AbFluorTM是新型的熒光標記物之一,產品覆蓋350-770nm。不同的AbFluor基團經恰當的激光可發光, 從而得知抗體的定位和待測抗原的分布情況,主要用于細胞分選或高分辨率免疫染色,是一種非常好的亞細胞水平定位的方法。

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圖片6.png



標簽選擇:

親和標簽:蛋白重組表達過程中采用親和標簽融合表達有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易;另一方面是為了促進某些不溶性蛋白可溶。蛋白標簽可分兩類:一類是短肽類標簽;一類是長肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達。使用不同的蛋白標簽需要根據具體案例來分析。

不同的系統步驟稍微有些不同的,大致步驟如下:

真核表達系統的重組蛋白表達步驟:

a.      選擇表達載體和宿主細胞(常用的CHO和HEK293)

b.      表達載體的構建

c.      無內毒素的質粒抽提

d.      細胞瞬時轉染

e.      表達小試,條件優化

f.       表達分析和鑒定(SDS-PGAE和WB)

g.      大量表達

h.      親和純化

i.        檢測和鑒定

原核表達系統的重組蛋白表達步驟:

a.      選擇表達載體

b.      密碼子優化

c.      基因合成/亞克隆

d.      轉化表達菌株

e.      蛋白表達小試分析

f.       如果蛋白可溶,蛋白親和純化

g.      如果蛋白不可溶,則需要變復性來制備可溶蛋白。

h.      鑒定,包括SDS-PAGE和WB鑒定

GZMH蛋白;表達蛋白的分析、純化、檢測

  誘導表達成功后,表達蛋白的分析、純化、檢測應該順當,按一般的實驗步驟做沒太大的問題。

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操作步驟

根據使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui終濃度為 1mM。混勻備用(PMSF 現用現加)。

1、樣品前處理:

a)對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。

b)對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管,然后再裂解。

c)對于組織樣品: 把切成細小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。

2、后處理:

將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作


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