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503次用纖連蛋白包被細胞培養板時，在分化前一天，將1ml纖連蛋白(10μg／ml)加入6孔細胞培養板(1ml／孔)，使其均勻分布在孔內。置于4℃過夜，使用時，提前2小時放于37℃細胞培養箱內孵育。EPC分化用的培養基主要有兩種，一種是M199，可根據實驗自己添加VEGF、IGF、bFGF等因子，并且可根據實驗結果自行調整；另一種是商品化的內皮細胞培養基EGM2或EGM2MV，提供VEGF、IGF、EGF、bFGF的混合物，雖然使用方便，但是這些因子的具體濃度未知，對于實驗的調整有局限性。
小鼠Lin-Scal+內皮祖細胞大約是6×106細胞／孔加入到纖連蛋白包被的6孔板中，進行分化，每兩天換一次液(4ml／孔)，可在分化的0、3、7、10、14天用相差顯微鏡觀察其形態變化，并用流式檢測其細胞表面標志物的變化。通常這些細胞zui初為懸浮狀態(0～3天)，在一周內轉變為多角形細胞，并逐漸貼壁。細胞逐漸增殖，2周時長滿。
0～3天時，細胞高表達造血內皮祖細胞表面標志物(Sea-1、CD117和AC133)，微量表達內皮細胞表面標志物(Flk-1、Tie-2、E-selectin)。此后，細胞逐漸失去造血內皮祖細胞表面標志物，增加內皮細胞表面標志物(Flk-1、Tie-2、E-selectin)的表達。到第14天時，細胞喪失造血內皮祖細胞表面標志物(Sea-1、CD117和AC133)，大量表達內皮細胞表面標志物(Flk-1、Tie-2、E-selectin)，暗示EPCs分化為內皮細胞。圖7-4-2是小鼠Lin-Scal+‘內皮祖細胞分化前后的特征。
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