蛋白表達及純化：

1.培養500ml哺乳動物細胞，然后將重組質粒轉染到細胞中，通過瞬時表達產生目標蛋白。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。

交付內容：純化好的目標蛋白及純化報告?？砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶撕灒?/span>Tag）或切除純化標簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達90%以上。

產品屬性：

英文名稱：Recombinant Proteasome 26S Subunit, ATPase 3 (PSMC3)

TBP1; Tat-binding protein 1; Proteasome subunit P50; 26S proteasome AAA-ATPase subunit RPT5

型號：GOY-01D2026

酶與激酶

物種：Homo sapiens (Human，人)

來源：原核表達

宿主E.coli

內毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細胞定位：：細胞核, 細胞質

預測分子量：52.7kDa

實際分子量：53kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標簽：Asn2~Ala439 with N-terminal His Tag

緩沖液成份：20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）

性狀：凍干粉

純度：> 97%

等電點：5.6

應用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相關產品：

NADH脫氫酶1(ND1)重組蛋白英文名稱：Recombinant NADH Dehydrogenase 1 (ND1)MT-ND1; MTND1; NAD1; NADH-ubiquinone oxidoreductase chain 1; Mitochondrially Encoded NADH Dehydrogenase 1物種：Human，人

羧酸酯酶2(CES2)真核蛋白英文名稱：Eukaryotic Carboxylesterase 2 (CES2)CE-2; CES2A1; PCE-2; iCE; Intestine,Liver; Methylumbelliferyl-acetate deacetylase 2; Cocaine esterase物種：Human，人

11-β-羥基類固醇脫氫酶1(HSD11b1)重組蛋白英文名稱：Recombinant 11-Beta-Hydroxysteroid Dehydrogenase Type 1 (HSD11b1)11DH; 11-beta-HSD1; HDL; HSD11; HSD11B; HSD11L; SDR26C1; Corticosteroid 11-beta-dehydrogenase isozyme 1; Short Chain Dehydrogenase/Reductase Family 26C,Member 1物種：Human，人

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管，離心10000轉/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉移至新的預冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

Ⅱ 培養細胞蛋白提取

1． 貼壁培養的細胞，吸去培養基后，加入10mL/150mm培養板的冷PBS洗兩次，每次振搖數次以盡量去除培養液；

2． 懸浮培養的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養液移至離心管中， 1000轉/分離心10 min，再用10mL/150mm培養板的冷PBS，1000轉/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數分鐘待用。

4． 細胞洗滌后，轉至新的預冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

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