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ELISA試劑盒背景深,全部呈有色(通常的Elisa背景值OD<0.2)
1 洗滌不充分,洗后未拍干,樣品中其它成分殘留或酶標記物殘留洗液準確配制;充分洗滌,靜置15秒,*拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應棄去不用,不要反復使用,否則易造成污染。
2 底物污染,未避光保存,出現顏色棄去底物,重新配置
3 樣品稀釋液污染棄去稀釋液,重新配置
4 吸頭重復使用,未洗凈或消毒不*吸頭盡可能一次性使用
5 不正確的孵育時間,溫度(尤其是底物孵育的時間)為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。*按照說明書要求。
6 偶聯抗體(streptavidin-HRP)濃度過高按照說明書調整到合適的濃度
7 ELISA板子不正確的貯存酶標板貯存于2-8 ℃;使用結合力低點的Elisa板
8 沒有正確封閉在標準品稀釋液中加入動物蛋白或延長封閉時間
9 樣本溶血嚴重建議使用非溶血或輕微溶血樣本,嚴重溶血樣本會導致背景偏高。
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