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液相色譜水相中常用的改性劑,你了解多少?

閱讀:2326      發布時間:2023-6-30
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在反相色譜中,流動相的選擇原則是:

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非極性/中性化合物分析一般用有機溶劑和水。極性(特別是離子型)化合物分析時,通常需要在水中加入酸/堿或者緩沖鹽來調整流動相pH值以獲得對稱的峰形和合理的保留時間。


向流動相中加入改性劑主要有以下兩種方式:

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01 氫離子抑制法

● 對于弱酸(3≤pka≤7)/弱堿(7≤pka≤8)組分,一般通過調節流動相的pH來抑制目標化合物的解離,以達到分離目的。弱酸的反相色譜保留值隨流動相pH值的減小而增大,當pH值遠小于弱酸的pka值(pH<pka-2)時,弱酸99%以上以分子形式存在,有利于在反相色譜柱上保留。

● 對于弱堿,情況相反(須pH>pka+2)。因此分析弱酸樣品時,通常在流動相中加入少量酸性緩沖液,如三氟yi酸等(實例見圖1);分析弱堿樣品時,則加入少量堿性緩沖液,如三乙胺等。

● 下表列出幾種常見緩沖鹽的pH值可用范圍。一般緩沖鹽濃度在5-50mmol/L范圍就夠用,濃度高的緩沖鹽(>50mmol/L)雖然緩沖能力增強,但可能在與高比例有機相混合時析出,對液相色譜輸液泵等產生不利影響。

1-草酸;2-酒石酸;3-奎寧酸;4-甲酸;

5-丙酮酸;6-蘋果酸;7-抗壞血酸;8-乳酸;

9-乙酸;10-馬來酸;11-檸檬酸;12-富馬酸;

13-順烏頭酸;14-丙烯酸;15-丙酸;16-檸康酸

02 離子對色譜法

● 對于強酸/堿及其他離子型化合物,需要在水中加入相應的“對/反離子",使其與待測組分離子結合生成弱極性的離子對化合物(中性締合物),以增加其在反相色譜柱(如C18、C8)上的保留,從而改善分離效果。

● 離子對試劑一般可分為酸性和堿性兩大類:

1)分析堿性物質常用的離子對試劑為烷基磺酸鹽(實例見圖2),如己烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉、十二烷基磺酸鈉等。

2)分離多羧基、磺酸基等酸性物質常用四丁基季銨鹽,如四丁基溴化銨、四丁基氯化銨等。被測組分保留時間與離子對性質、濃度、流動相組成及其pH值等都有關。


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