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液相色譜柱在使用過程中常見問題

液相色譜是一種的分析手段，液相色譜柱是色譜分析系統(tǒng)的“心臟”，由于被分析樣品種類繁多，加之樣品基質(zhì)復(fù)雜，色譜柱極易被強(qiáng)保留物質(zhì)污染。這些強(qiáng)保留物質(zhì)通常難以洗脫，多次上樣后，聚集在柱頭端，堵塞篩板，甚至可能與填料發(fā)生相互作用導(dǎo)致填料變性，這會導(dǎo)致柱效下降，分離度降低和峰型異常等現(xiàn)象。因而液相色譜柱的維護(hù)是十分必要的。

正常的篩板                                                         堵塞的篩板

月旭科技液相色譜柱維護(hù)

液相色譜柱需要維護(hù)，但是不同廠家的色譜柱維護(hù)方式各不相同。月旭科技液相色譜柱推薦正向使用，反向沖洗。因為月旭的色譜柱兩端用的篩板孔徑是一樣的，不會存在反沖時把填料沖出來的情況。當(dāng)做完樣品分析后，絕大部分污染物都富集于柱頭端，這個時候如果立即進(jìn)行反沖可以很大程度上延長色譜柱填料壽命。

液相色譜柱如何反沖

液相色譜柱反沖時遵循的原則是用比流動相洗脫能力更強(qiáng)的溶劑沖洗。

反相色譜柱（C18、C8）可以選擇極性較小的溶劑反向沖洗，推薦如下沖洗方法：

水→甲醇→乙腈→異丙醇→二氯甲烷→異丙醇→乙腈

正相色譜柱（SiO2， NH2，CN， DIOL）可以選擇極性較大的溶劑反向沖洗，沖洗方法如下：

正己烷→二氯甲烷→乙酸乙酯→異丙醇→乙腈→甲醇

如果流動相中含有緩沖鹽，在運(yùn)行序列過程中出現(xiàn)柱壓異常升高的現(xiàn)象，則發(fā)生了緩沖鹽在色譜柱柱床上析出，推薦采用如下維護(hù)方法：

• 用甲醇/水＝10/90以分析流速35℃柱溫反向沖洗色譜柱60個柱體積；

• 用甲醇/水＝10/90以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過夜。

含緩沖鹽的流動相正確使用方法：

例子：流動相中有緩沖鹽，嘗試用10%甲醇 0.2ml/min反向沖洗一晚上后柱效恢復(fù)正常。

色譜柱：Ultimate XB-C18， 4.6×250mm，5μm。

波長  ：254nm；

流動相：甲醇-水=75：25；

溫度  ：25℃；

流速  ：1.0ml/min；

進(jìn)樣量：20μL。